[发明专利]用于增加Fc融合蛋白的血清半寿期的组合物和方法

权利要求书

1.一种用于制备编码修饰Fc融合蛋白的修饰核酸的方法，所述修饰Fc融合蛋白相对于最初Fc融合蛋白具有延长的血清半寿期，其中修饰Fc融合蛋白和最初Fc融合蛋白各自包含Fc部分和异源部分，所述方法包括：修饰编码最初Fc融合蛋白的异源部分的核酸，以编码一个或多个附加的N联糖基化位点，其中(a)修饰的核酸编码以下修饰Fc融合蛋白，其在合适细胞培养物中表达时，具有比最初Fc融合蛋白的血清半寿期至少长10%的血清半寿期，如在药代动力学猴测定中所测定的；和(b)相对于未修饰Fc融合蛋白，修饰Fc融合蛋白具有基本上相同或更高的体内生物活性。

2.权利要求1的方法，其中将一个或多个附加的N联糖基化位点引入表面暴露的异源部分的一个或多个氨基酸序列中。

3.权利要求2的方法，其中将一个或多个附加的N联糖基化位点引入表面暴露且未掺入β折叠或α螺旋中的异源部分的一个或多个氨基酸序列中。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述异源部分包含配体结合域。

5.权利要求4的方法，其中所述配体结合域来源于跨膜受体的胞外域。

6.权利要求4或5的方法，其中在异源部分的以下位置上引入一个或多个附加的N联糖基化位点，所述位置使得任何附加的糖部分基本上不会干扰配体结合域。

7.权利要求4-6中任一项的方法，其中在以下位置引入一个或多个附加的N联糖基化位点，所述位置使得配体结合域的氨基酸序列不被修饰。

8.权利要求4-7中任一项的方法，其中在以下位置引入一个或多个附加的N联糖基化位点，所述位置使得与附加的N联糖基化位点连接的任何糖部分被预测为基本上不会干扰配体结合界面。

9.权利要求4-8中任一项的方法，其中修饰Fc融合蛋白与配体结合的半数最大抑制浓度(IC₅₀)不小于最初Fc融合蛋白的1/2。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中通过添加或缺失至少一个氨基酸残基以引入至少一个糖基化位点，来修饰最初Fc融合蛋白。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中通过取代至少一个氨基酸残基以引入至少一个糖基化位点，来修饰最初Fc融合蛋白。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中最初Fc融合蛋白的异源部分包含通过表面暴露的松散多肽区连接的至少两个结构上不同的α螺旋和/或β折叠结构域。

13.权利要求12的方法，其中将附加的N联糖基化位点置于松散的肽区之内。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中最初Fc融合蛋白的异源部分的每90个氨基酸中包含少于一个N联糖基化位点。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中最初Fc融合蛋白的异源部分的每125个氨基酸中包含少于一个N联糖基化位点。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中修饰Fc融合蛋白的异源部分的每90个氨基酸中包含至少一个N联糖基化位点。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中修饰Fc融合蛋白的异源部分的每65个氨基酸中包含至少一个N联糖基化位点。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中通过至少20个氨基酸将与N联糖基化连接的修饰Fc融合蛋白异源部分的每个氨基酸与任何其他被N联糖基化修饰的氨基酸隔开。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中最初Fc融合蛋白还包含不含N联糖基化位点的在Fc部分和异源部分之间的多肽接头。

20.权利要求1-18中任一项的方法，其中修饰Fc融合蛋白包含置于接头之内的N联糖基化位点。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述异源部分包含含有配体结合域的TNFR2受体的胞外域。

22.权利要求21的方法，其中TNFR2受体的胞外域包含与SEQ ID NO: 2有至少90%同一性的氨基酸序列。