[发明专利]基于顶复虫Ferlin、Ferlin样蛋白和其它含有C2结构域的蛋白的疟疾疫苗

说明书

本发明涉及用作疟疾疫苗的肽，所述肽含有至少一种顶复虫Ferlin、Ferlin样蛋白和/或另外的含有C2结构域的蛋白的抗原决定簇或表位。本发明进一步涉及含有所述肽的组合物以及该组合物作为疟疾疫苗的应用。

发明背景

疟疾每年导致超过2百万人死亡，主要在非洲。然而，可持续控制该疾病所必需的有效疫苗仍未出现。抗疟疾预防接种的可行性已经通过使用辐射减毒子孢子(RAS)得到了充分地证明，RAS通过靶向子孢子(由叮咬的按蚊接种于皮肤内)和随后的寄生虫肝期来保护啮齿类动物、非人灵长类动物和人类。RAS的发育在肝内中断，因此这些寄生虫没有发展到诱导疾病的血液期感染(图1)。然而，尽管由经γ-辐射的寄生虫提供了灭菌免疫，实践中的问题(包括大规模生产和确保最终产品的一致性)使得该疫苗不太可能被允许用于人体。然而，RAS是实验室研究较好的实验预防接种模型。RAS模型中最占优势的免疫应答是由环子孢子表面蛋白(CSP；图2)所激活的。这些发现促进了基于CS蛋白的RTS,S疫苗的发展。迄今为止RTS,S是市场上最先进的疟疾疫苗，目前已处于临床III期。对健康志愿者和生活在发病地区的非洲儿童的研究显示了该疫苗的良好耐受性及安全性。然而，RTS,S和不同佐剂系统的有效性仅为40-60%。此外在CS转基因小鼠中的观察结果表明，在耐受CSP的小鼠内也观察到了保护作用，这提示了有其它的诱导宿主免疫应答的抗原存在。研究RAS诱导的免疫应答总受这样的事实所限制：注入的子孢子的遗传学背景在子孢子个体以及不同批次的子孢子之间高度变化，这也导致了不同表达的抗原。基因靶向技术的最新发展促进了基因减毒寄生虫(GAP)的产生，所述GAP在对寄生虫发育所必需的基因内带有确定的突变。类似于RAS，GAP也在肝内减弱，并且赋予阶段特异性的灭菌免疫，但是GAP在感染开始后的特定的时间点(~24小时)以及很特定的分化阶段被阻滞(图1)。作为对比，RAS带有多个非均一的突变并且生长阻滞发生在多个阶段。因此，明确的基因减毒寄生虫(uis3(-)和/或uis4(-))成为进一步表征对肝期寄生虫的保护性免疫应答的理想工具。基因敲除小鼠的研究表明，产生γ-干扰素的T淋巴细胞介导GAP诱导的免疫，而B细胞并不重要。进一步的研究甚至披露了CD8+ T细胞是主要的参与者。然而，涉及该免疫的抗原特异性和效应子机制仍未被了解。

本发明的目的在于提供有效的疟疾疫苗的手段。更特别地，本发明的目的在于鉴定对免疫很重要的新抗原。

本发明优选实施方式的描述

在下面更详细描述本发明之前，需要理解的是，本发明不限于本文描述的特定的方法学、方案和试剂，因为这些可变化。还需要理解的是，本文所用的术语仅仅为了描述特定的实施方式，而非用于限制本发明的范围，本发明的范围仅仅受所附的权利要求所限制。除非另有说明，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有本领域一般技术人员所通常理解的相同含义。为了本发明的目的，本文引述的所有参考文献以全文参照的方式结合于此。

按照本发明，上面的目的通过用作疟疾疫苗的含有至少一种顶复虫蛋白的抗原决定簇或表位的肽来解决，所述的顶复虫蛋白选自：

Ferlin，

Ferlin样蛋白家族的成员，和

其它含有C2结构域的蛋白。

本文使用的术语“肽”是指肽，在其长度或尺寸方面没有限制。因此，在一个实施方式中，所述肽是顶复虫蛋白本身或其(较大的)片段。在另外的实施方式中，所述肽具有5－50个氨基酸，更优选8－25个氨基酸，更优选8－15个氨基酸。