[发明专利]修饰的CRY1CA杀虫CRY蛋白无效

专利信息
申请号: 201080064011.6 申请日: 2010-12-16
公开(公告)号: CN102762096A 公开(公告)日: 2012-10-31
发明(设计)人: T.米德;K.纳瓦;T.海伊;I.拉里努阿;A.T.伍斯利;S.L.伯顿 申请(专利权)人: 陶氏益农公司
主分类号: A01H5/00 分类号: A01H5/00;C07K14/325
代理公司: 北京市柳沈律师事务所 11105 代理人: 张文辉
地址: 美国印*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 修饰 cry1ca 杀虫 cry 蛋白
【权利要求书】:

1.一种具有杀虫活性的Cry1Ca变体蛋白,其中相应于野生型Cyr1Ca的N-端α-螺旋1,2A,和/或2B的所有或部分被删除。

2.权利要求1的变体蛋白,其中的删除移除了结构域I中α-螺旋1的全部和α-螺旋2的全部或部分,所述蛋白包含α-螺旋3至7。

3.权利要求1的变体蛋白,其中所述删除改进了杀虫蛋白DIG-109的杀虫活性,其中所述删除起始于α-螺旋2A起始点之前并终止于α-螺旋2B终点之后但是不延伸至α-螺旋3内。

4.权利要求1的变体蛋白,其中所述删除改进了杀虫蛋白DIG-152的杀虫活性,其中所述删除起始于α-螺旋2A起始点之前并终止于α-螺旋2B终点之后但是不延伸至α-螺旋3内。

5.权利要求1的变体蛋白,其中N-端删除以至少一个不稳定氨基酸开始,并且所述蛋白包含添加的密码子,该密码子在翻译起始的蛋氨酸和所述不稳定氨基酸之间指定编码(specify)甘氨酸。

6.权利要求1的变体蛋白,其中所述蛋白缺少C-端原毒素序列。

7.修饰的Cry1Ca蛋白,包含在α-螺旋2B和α-螺旋3之间的间隔区内引入的蛋白酶切割位点。

8.权利要求7的修饰的蛋白,其中所述蛋白酶切割位点引入在SEQ ID NO:1的Cry1Ca核心毒素蛋白的氨基酸85-90内。

9.权利要求1或7的蛋白,其中所述蛋白具有改进的针对昆虫的活性。

10.权利要求9的蛋白,其中所述昆虫选自秋粘虫和甘蔗螟(sugarcane borer)。

11.修饰的Cyr1Ca蛋白,包含交换的或重排的/改组的选自结构域II和结构域III的结构域。

12.权利要求1的蛋白,包含核心毒素片段,该片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-619,其中具有多至10个,多至15个,或多至20个氨基酸的添加,删除或取代。

13.一种融合的杀虫蛋白,包含源自Cry1Ca杀虫蛋白的N-端核心毒素片段,其与异源δ内毒素原毒素片段在所述核心毒素片段之后的位点融合。

14.权利要求12的蛋白,所述蛋白包含SEQ ID NO:1的残基28-619的氨基酸序列,并具有多至20个氨基酸的取代,删除或修饰。

15.权利要求12的蛋白,所述蛋白包含SEQ ID NO:1的残基1-619,并具有至多20个氨基酸的取代,删除或修饰。

16.分离的蛋白,其与选自SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:35,和SEQ IDNO:1的序列具有至少90%的同一性。

17.权利要求16的蛋白,其中所述蛋白包含选自SEQ ID NO:3,SEQ IDNO:5,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQID NO:35,和SEQ ID NO:1的序列。

18.分离的多核苷酸,其编码权利要求16的蛋白。

19.权利要求18的多核苷酸,其中所述多核苷酸与选自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ IDNO:34,SEQ ID NO:36,和SEQ ID NO:2的序列具有至少90%的同一性。

20.控制鳞翅目昆虫的方法,所述方法包括使所述昆虫接触权利要求16的蛋白。

21.产生权利要求16的蛋白的植物细胞。

22.包含权利要求18的多核苷酸的微生物细胞。

23.包含多个权利要求21的细胞的植物。

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