[发明专利]一种表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组腺病毒

权利要求书

1.一种表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组腺病毒，其特征在于在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点的Bgl II和Kpn I酶切位点中插入猪瘟病毒E0基因，在Xho I和XbaI酶切位点中插入腺病毒CMV启动子和猪瘟病毒E2基因的CMV-E2片段。

2.如权利要求1所述的表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组腺病毒，其特征在于所述猪瘟病毒为常规的市购病毒，猪瘟病毒的E0基因在GenBank中的登录号为：AF058715.1，猪瘟病毒的E2基因在GenBank中的登录号为：AY775178.2

3.如权利要求1所述的表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组腺病毒，其特征在于所述腺病毒为常规的市购人-5型非复制型腺病毒。

4.一种如权利要求1所述的表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组腺病毒的构建方法，其特征在于包括下列构建步骤：

A.从市购的猪瘟病毒和猪瘟病毒中分别扩增出E0和E2基因；

B.将步骤A获得的猪瘟病毒E0基因通过Bgl II和Kpn I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中，形成腺病毒穿梭载体pAdTrack-E0；

C.将步骤A获得的猪瘟病毒E2基因通过Kpn I和Not I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中，形成腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2；

D.将步骤C的腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2按常规的PCR方法扩增出含有CMV启动子的CMV-E2基因，通过Xhol I和Xba I酶切位点插入至步骤B的腺病毒穿梭载体pAdTrack-E0中的Xhol I和Xba I酶切位点中，形成重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E0-CMV-E2；

E.将步骤D的重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E0-CMV-E2经Pme I酶切线性化后，转化到含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中，形成重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E0-CMV-E2；

F.将重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E0-CMV-E2经Pac I线性化后，转染人胚胎肾细胞HEK293中，包装出重组腺病毒rAd-E0-CMV-E2。