[发明专利]一种从迷迭香叶提取物中分离鼠尾草酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从迷迭香叶提取物中分离鼠尾草酸的方法。

背景技术

迷迭香(Rosmarinus offoconalis L.)为唇形科迷迭香属植物，富含多种高效、安全的抗氧化成分。迷迭香提取物是一类新型优良的天然抗氧化剂，能够有效清除体内自由基，防止食品变质，并且具有消炎、抗肿瘤、抗艾滋病毒等功效([1]杨燕.迷迭香抽提物的性质与应用[J].中国食品工业，1999，(3)：38-39.[2]OffordEA，MacéK，Avanti O，et al.Cancer Letters[J].1997，114(12)：275-281.)。鼠尾草酸(Carnosic Acid，CA)是迷迭香脂溶性抗氧化剂中最主要的有效成分，不仅具有抗氧化活性，而且具有抗癌特性，在化妆品、药物和保健品等领域有广泛的应用。

目前国内外对分离鼠尾草酸的研究中主要存在以下难点：1、鼠尾草酸在众多溶剂中稳定性很差，易被氧化，溶剂分离方法几乎不可能获得高含量产品；2、普通硅胶柱层析方法分离鼠尾草酸的时间均较长，鼠尾草酸组分流出慢，效率低；3、大多数分离的后续步骤包含重结晶过程中，鼠尾草酸不仅溶剂稳定性差，而且热稳定性同样不好；4、成本高，不具有实际经济效益。因此，国际国内市场上能够提供的鼠尾草酸标准品的最高含量为92％。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种从迷迭香叶提取物中分离鼠尾草酸的方法，利用该方法鼠尾草酸组分流出快，时间短，且含量高。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种从迷迭香叶提取物中分离鼠尾草酸的方法，包括以下步骤：

(1)将柱层析硅胶分散在由无水乙醇∶磷酸＝200∶2.5～200∶7.5v/v制成的磷酸-乙醇溶液中，所述磷酸∶硅胶为1∶40～3∶40v/w，抽真空，再超声浸润，然后回收乙醇，烘干得到磷酸-硅胶固定相；

(2)将迷迭香叶提取物溶于乙酸乙酯中，将迷迭香叶提取物∶磷酸-硅胶固定相＝1∶4～1∶6w/w，加入磷酸-硅胶固定相，充分搅拌后回收乙酸乙酯，得到吸附迷迭香叶提取物的固定相；

(3)将步骤(1)的磷酸-硅胶固定相填充至已通入高纯氮气保护的层析柱管中，得到磷酸-硅胶层析柱；

(4)将步骤(2)的吸附迷迭香叶提取物的固定相加入到步骤(3)的磷酸-硅胶层析柱中进行分离，采用乙酸乙酯∶正己烷＝5∶95～18∶82v/v的混合溶液作为洗脱液，收集洗脱组分；

(5)将洗脱组分减压蒸馏至溶液变浑浊，冷藏至晶体析出，倾出溶剂，晶体经真空干燥后，充高纯氮气保存，即得鼠尾草酸。

优选地，所述步骤(1)中磷酸∶硅胶为2∶40。

优选地，所述步骤(2)中迷迭香叶提取物∶磷酸-硅胶固定相＝1∶5。如果磷酸-硅胶固定相过少，迷迭香叶提取物超出硅胶的担载量，分离的色带易重叠，影响分离效果；过多，会造成磷酸-硅胶固定相的浪费，因此，迷迭香叶提取物∶磷酸-硅胶固定相＝1∶5最为适宜。用少量磷酸-硅胶固定相来吸附迷迭香叶提取物，提高了鼠尾草酸在样品处理过程中的利用率。

优选地，所述步骤(4)中乙酸乙酯∶正己烷＝10∶90v/v，乙酸乙酯含量过多，洗脱液极性太大，会使洗脱速度过快，鼠尾草酸和其他较高极性的物质不能得到很好的分离；乙酸乙酯含量过少，洗脱速度过慢，分离时间长导致鼠尾草酸被氧化，因此，乙酸乙酯∶正己烷＝10∶90v/v最为适宜。

和现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：

本发明使用磷酸-硅胶固定相来分离鼠尾草酸，通过酸性环境在一定程度上保持了鼠尾草酸的稳定性；只需一次过柱就将鼠尾草酸单独分离出来，过柱时间短，鼠尾草酸在第一个色带前已出峰，即在分离时组分最先流出，可以节省洗脱液的用量，提高经济效益；操作时间短，有效地提高了鼠尾草酸的纯度，通氮气保护结晶后含量可达92％，抗氧化活性好，达到市售标准品含量指标。

具体实施方式

以下结合具体实施例来详细说明本发明。

以下实施例所用试剂与仪器如下：

柱层析硅胶(200-300固，青岛海洋化工厂)、正己烷、乙酸乙酯、磷酸(均为市售分析纯试剂)、石英双蒸水(由申请人实验室自制)、含60％鼠尾草酸的迷迭香叶提取物(市售)。