[发明专利]黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法，属于植物生物技术领域。

背景技术：

我国是世界上黄瓜生产面积最大、总产量最高的国家，在全国各地均有种植。黄瓜又是病虫害最多，受病虫危害最重的蔬菜之一，生长过程中经常受到多种病害的危害，对农药的需求量很大，需求种类也较多，是现在农药残留超标的主要蔬菜品种之一。随着我国黄瓜生产的产业化，品种的要求也越来越严格，不仅要求高产、抗病、优质，黄瓜的果实形状及口感、低农药残留量等也成为重要的种植指标。为了满足国内市场的需求，并尽快与国际市场接轨，解决黄瓜农药残留超标问题迫在眉睫。

黄瓜霜霉病是黄瓜生产中的主要病害之一，其来势猛、传播快、为害重，能在1-2周内使植株大部分叶片枯死，造成严重减产，以致绝收。为了防治霜霉病，在生产上需使用大量农药，其中霜霉威(Propamocarb)是抑制霜霉病危害的主要喷洒类药剂之一，能够有效地抑制黄瓜霜霉病的扩散，目前在生产上已经广泛使用。研究表明，黄瓜农药残留量与生态类型关系密切，华南型黄瓜农残量相对最高，其次为华北型，欧洲型含量略低于华北型，腌渍型的农残含量相对最低(见参考文献：刘芳芳，秦智伟，周秀艳.低农药残留量的黄瓜种质资源筛选.东北农业大学学报，2010，41(7)：32-36)，然而与黄瓜农药残留量相关基因的研究还未见报道。因此寻找与黄瓜霜霉威残留性相关基因紧密连锁的分子标记，对于加快无公害黄瓜育种进程具有重要的实际应用价值。

发明内容：

本发明的目的是针对上述存在的问题提供一种黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法，能够更好地利用上述黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记，并将黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记应用于黄瓜育种的辅助选择。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法，该方法包括如下步骤：

以霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT14为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3％琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7.5％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的低霜霉威残留性黄瓜东农803带型一致，则该霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系为低霜霉威残留性品种或品系，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，57℃退火1min，35个循环，72℃延伸1min，72℃延伸10min，最后4℃保存，所述的CSWCT14为：

引物1：5’-TCCAATCGACCTAAATCCAAA-3’，

引物2：5’-TGGCCCTAACTGTTGATGC-3’。

所述的黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法，所述PCR扩增中，每20μl的PCR反应体系如下：10×buffer：2μl，2mM dNTP：2μl，10pmol/μl的Primer 1：0.8μl，10pmol/μl的Primer 2：0.8μl，25mM MgCl₂：2.5μl，5U/μl的TaqDNA聚合酶：0.2μl，60ng/μl的模板DNA：1μl，ddH2O：10.7μl。

黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法在辅助选择无公害黄瓜材料中的应用。

有益效果：

1.本发明直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题，因此，本发明能够克服黄瓜霜霉威残留性鉴定易受环境影响的缺点，在苗期就能够通过分子标记对黄瓜品种和品系的霜霉威残留性进行鉴定和筛选，淘汰高霜霉威残留性植株，减少人力和物力的浪费，提高育种效率。同时，DNA分子标记技术操作简单，成本低廉，用时短，在一天内即可完成全部的检测过程。

2.所需样本数量少，操作比较简便，效率高，成本低廉。

3.本发明易于掌握，不受环境条件影响，重复性高。

附图说明：

图1黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记的琼脂糖电泳检测结果(东农804)。M：DL2000DNA Marker；1：对照东农803；2～15：东农804单株。

图2黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记的琼脂糖电泳检测结果(东农805)。M：DL2000DNA Marker；1：对照东农803；2～8：东农805单株。

具体实施方式：