[发明专利]检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA试剂盒

权利要求书

1.检测猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratorysyndrome，PRRS)抗体的ELISA试剂盒，包括以下组分：

(1)ELISA板条：以猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的重组GP5蛋白作为包被抗原，每一试剂盒装有4块经1％(M/V)牛血清白蛋白(BSA)封闭的板条，以包装袋密封包装于4℃保存；

(2)洗涤液：1倍浓度的pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)溶液；

(3)血清稀释液：1％(M/V)BSA 100毫升；

(4)显色底物：已加入H₂O₂的四甲基联苯胺(TMB)溶液100毫升，其中每10毫升溶液TMB中含有30％(M/V)浓度H₂O₂15μL；

(5)兔抗猪酶标二抗：已用血清稀释液1％(M/V)BSA稀释至工作浓度1∶800的兔抗猪酶标二抗100毫升；

(6)终止液：2M H₂SO₄溶液100毫升；

(7)PRRS阳性血清：5毫升；

(8)PRRS阴性血清：5毫升。

2.权利要求1所述ELISA试剂盒在检测猪繁殖与呼吸综合征抗体中的应用，主要操作步骤如下：

(1)加入血清样品

用血清稀释液1％(M/V)BSA将被检血清作1∶50倍稀释后，每孔加入100μL，每一血清样品添加两孔，同时设立PRRS阴、阳性血清作为对照，各添加两孔；室温下作用45分钟，弃去反应孔中的液体；将每个孔用约200μL的洗涤液充分清洗3-5次，每次持续4-5分钟，在每次洗涤后将反应孔中的液体除去，最后一次除去洗涤液后，除去残留的液体；

(2)加入兔抗猪酶标二抗：

每孔加入100μL兔抗猪酶标二抗，室温作用45分钟，洗涤3-5次；

(3)加入显色底物：

每孔加入100μL已加入H₂O₂的TMB溶液，室温下作用15分钟；

(4)终止反应：

向每孔中加入100μL 2M H₂SO₄终止液终止反应；

(5)用酶标仪测定OD值

在450nm波长下测定各孔吸光度OD值，随后判定结果；

(6)结果判定

当样本OD450nm≥0.21时为阳性，＜0.21的样本为阴性。