[发明专利]一种含HIV-1 CRF01-AE亚型RT基因的杂交免疫缺陷质粒、病毒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种含HIV-1 CRF 01-AE亚型RT基因的杂交免疫缺陷质粒、病毒RT-SHIV/AE及其在构建AE亚型RT-SHIV猴模型中的应用。

背景技术

艾滋病，又称为获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的一类死亡率极高的传染性疾病，对全球尤其是亚洲和非洲发展中国家的人民的生命健康安全威胁极大。目前流行于全球的HIV-1分为三组，M组、O组和N组，M组内又可分为A～J 10个亚型，各亚型间的基因离散率是20％～35％，同时，还有数十种循环重组型存在。HIV-1CRF 01-AE亚型病毒1989年最先在泰国发现，主要在性传播人群中流行扩散，在吸毒人群中广泛传播，改变了以往B亚型感染为主的流行格局。近年来，CRF 01-AE亚型病毒日益泛滥，正在成为我国最流行的HIV-1病毒亚型。

高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Anti-Retroviral Therapy，HAART)的发明是艾滋病防治道路上的一个重大进步。大多数的患者经过HAART的治疗能抑制HIV-1病毒的复制，使病毒的载量处于一个低水平状态，这种疗法的应用能降低死亡率和提高病人的生活质量。HAART中含有三类抗逆转录病毒的药物，分别为：

(1)核苷酸近似体逆转录酶抑制剂(NRTIs)。NRTIs中含有缺少3-OH的核苷酸，通过这种缺少3-OH的核苷酸在逆转录的过程中与RT基因结合，从而阻断DNA链的形成，使逆转录过程失败。

(2)非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)。NNRTIs是一种与逆 转录酶结合的非竞争性抑制剂，主要在化学合成方面发挥作用而阻断DNA的合成。

(3)蛋白酶抑制剂(PIs)。PIs与病毒蛋白酶催化基因结合抑制酶活性，导致蛋白前体不能裂解和形成成熟病毒体。

早期的HAART方案包含一种蛋白酶抑制剂和两种核苷酸近似体逆转录酶抑制剂。非核苷类逆转录酶抑制剂研制成功后，便广泛的应用于HAART方案中。现今主流的逆转录疗法主要包括两种NRTIs和一种NNRTI或PI的组合。

HAART治疗的过程中潜伏和残余的病毒仍在持续复制，并未从体内剔除，并且长期的治疗会导致HIV病毒的耐药性突变，一旦产生突变将会导致病毒载量的反弹和治疗的失败，HIV病毒耐药性突变是导致HARRT治疗失败的一个主要原因。为了更好的研究病毒的耐药性突变以及对药物的有效性进行合理评价，需要选用合适的动物模型进行研究。动物模型在研究HIV-1抗病毒耐药性问题存在很多的优点，使用合适的动物模型可以研究病毒在人体内的复制情况，包括不同的细胞亚群对病毒感染的反应、免疫选择压力、不同位点的病毒复制特点等。

HIV与SIV同属于逆转录病毒科慢病毒属，且同属于灵长类慢病毒组，关系最为密切。恒河猴感染猴免疫缺陷病毒SIV和人感染HIV-1存在着相似性，继而发展出的症状也和AIDS相似，这些特点可以使SIV/恒河猴动物模型用于抗逆转录治疗的研究。然而，恒河猴感染SIV作为一个治疗性的动物模型还存在一些限制，SIV的RT和HIV-1的RT的相似性为60％，在对于药物的易感性和非核苷逆转录酶抑制性上存在着差异，主要问题为HIV和SIV中的逆转录酶RT基因对药物的敏感性不同。

国外科学家经过基因操作手段将人免疫缺陷病毒HIV的RT基因替换猴免疫缺陷病毒SIV的RT基因得到嵌合病毒RT-SHIV来解决这个问题，该嵌合病毒RT-SHIV包含有抗HIV病毒药物的主要靶点-HIV RT基因。由RT-SHIV建立的恒河猴动物模型能够对抗逆转录 病毒药物进行有效性的筛选，以及深入的研究和了解更多关于治疗过程中病毒抗性，残留病毒的持续复制等问题。

现有RT-SHIV病毒均携带HIV-1B亚型的RT基因，B亚型主要在欧美流行，这种RT-SHIV适合研究欧美艾滋病治疗问题，而中国的HIV-1流行株主要为CRF-BC亚型，CRF-AE亚型和B’亚型，其中又有以CRF 01-AE亚型为主，HIV-1B亚型与CRF 01-AE亚型两者RT基因的同源性只有90.36％，特别是有很多耐药位点的差异，因此B亚型的RT-SHIV不适合针对中国患者的艾滋病药物研究。