[发明专利]一种乙醇脱氢酶基因及编码的多肽

权利要求书

1.一种乙醇脱氢酶基因，其特征在于，所述的乙醇脱氢酶基因具有如SEQ IDNO.1所示的碱基序列，全长为1245bp，其编码由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列中375个氨基酸组成的蛋白质。

2.一种如权利要求1所述的乙醇脱氢酶基因的获得方法，所述的乙醇脱氢酶基因ADH是来源于产麻黄碱的转基因重组酵母CGMCC No.1499，通过SSH和cDNA 3′和5′末端快速扩增(RACE)获得，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)采用低能氩离子(Ar⁺)注入介导野生蓝麻黄(Ephedra glauca L.)基因组DNA在异常汉逊酵母(Hansenula anomala)中随机转化，转化后的酵母菌通过目标性状的筛选，获得生物合成麻黄碱重组酵母菌株CGMCC No.1499；

(2)将步骤1中所获得转基因酵母菌和出发菌株进行培养，并分别提取其总RNA，以转基因酵母为实验组，出发菌株为驱动组，进行抑制差减杂交实验，构建了转基因酵母与出发菌株之间的差减文库；PCR鉴定重组子进行测序，获得一段363bp的基因片段；测序结果用BLASTn程序在GenBank数据库中进行序列相似性搜索，确定该基因片段为乙醇脱氢酶基因；

(3)将步骤2获得乙醇脱氢酶基因片段分别设计cDNA 3′和5′RACE的嵌套式引物各一对；提取重组酵母CGMCC No.1499总RNA，利用已设计的3′和5′RACE引物，对乙醇脱氢酶的3′和5′末端进行扩增；将3′和5′RACE扩增结果进行回收，连接T-载体，检测重组子后进行测序，测序获得乙醇脱氢酶基因3′和5′端序列信息；将获的乙醇脱氢酶基因片段用GeneTool软件进行拼接，得到完整的基因核苷酸序列SEQ ID NO.1。

3.一种乙醇脱氢酶，其特征在于，该乙醇脱氢酶蛋白质是由权利要求1所述的基因所编码，具有如SEQ ID NO.1所示的碱基序列和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其来源于产麻黄碱的转基因重组异常汉逊酵母(Hansenula anomala)CGMCC No.1499。

4.如权利要求1所述的一种乙醇脱氢酶基因，其特征在于，所述的乙醇脱氢酶基因编码由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的衍生物，如SEQID NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸残基且具有相同的乙醇脱氢酶活性的序列2衍生蛋白质，包括在蛋白质C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸。