[发明专利]酶法检测腺苷脱氨酶试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及生物试剂，具体涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种酶法检测腺苷脱氨酶试剂盒。

背景技术：

腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的重要酶类，属于巯基酶，每个分子至少含2个活性巯基，因而其能对氯汞甲酸完全抑制。另外，ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢终产物为尿酸。ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，该酶在T淋巴细胞比B淋巴细胞活性更高。目前，腺苷脱氨酶(ADA)在临床的应用主要有：

一、用于肝胆疾病的诊断

1.急性肝炎患者ADA与ALT均显著升高。乙型肝炎患者ALT的升高大于ADA，而非甲非乙肝炎病人ADA的升高大于ALT，非甲非乙肝炎患者ADA活性极度升高者多易转变为迁延性肝炎。2.慢性肝炎患者ADA活性均升高，慢性活动型肝炎比非活动型升高更甚。3.肝纤维化、肝硬化及慢性肝炎患者ADA活性显著升高而ALT不升高，所以同时测定ALT和ADA更具有临床价值。4.阻塞性黄疸ADA不升高，而肝细胞性黄疸ADA活性升高，因此测定血清ADA有助于黄疸类型的鉴别诊断。

二、用于结核性胸膜炎及结核性腹膜炎的诊断：胸腹腔积液ADA活性测定，可区别胸腹腔积液的性质。结核性胸膜炎及结核性腹膜炎病人胸腹腔积液中ADA活性明显高于癌症和心衰性胸腔积液中的ADA活性，且积液中ADA/血清ADA的比值大于1，所以测定胸腹水和血清ADA活性及比值是诊断结核性胸膜炎和结核性腹膜炎的一项可靠有效的指标。

三、伤寒病：伤寒病人ADA活性显著升高，明显高于非伤寒的发热患者，ADA敏感性达100％，特异性92.3％，伤寒发病初期可高于正常人2～4倍，极期及缓解期仍持续处于高水平，至病程第4周逐渐降低，所以ADA检测对伤寒病的早期诊断很有价值。

四、其它疾病：如传染性单核细胞增多症、粟粒性结核、风湿热、溶血性贫血、白血病及部分肿瘤病人，血清ADA可不同程度的升高。联合免疫缺陷病(SCID)，全身各组织细胞ADA活性均缺少。结核性脑膜炎病人的脑脊液中ADA活性升高，其它脑膜炎不升高，因此脑脊液中ADA活性测定可鉴别结核性脑膜炎。

ADA活性的检测方法一般有生化法和放射核素法，后者灵敏度高，但有放射性污染，所以生化方法应用较广泛。

比色法：采用显色反应测定，以单位时间内释放出来的氨量来推算ADA活性。目前中国多采用此法，其优点为无需特殊仪器和试剂；但仅适用于手工操作，且反应时间长，干扰因素也较多，难以获得快速而准确的结果。

酶偶联法偶联，一般使用嘌呤核苷磷酸化酶(Purine nucleosidehosphorylase，PNP)和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)过氧化物酶(PEROXIDASE，PEO)。过氧化氢在过氧化物酶作用下与N乙醛一N一3一甲基苯胺和氨基安替比林反应生成醌染料，动力学连续监测醌浓度来测定ADA活性。此法特异性好，精密度高，重复性好，线性范围可达200U/I，显著优于已知的其他化学法。试剂稳定性较好，2℃～8C温度下储存可稳定一年，该方法应用较多。

酶法原理：

  腺苷ADA＞次黄苷+NH₄⁺

次黄苷+Pi PNP＞次黄嘌呤+核糖-1-磷酸

  次黄嘌呤XOD＞尿酸+H₂O₂

  H₂O₂+4-AAP+EHSPT POD＞红色醌衍生物+H₂O

但是目前该检测方法有些缺点，PNP(嘌呤核苷磷酸化酶)试剂价格昂贵、使用价格高，PNP试剂不稳定，试剂反应速度慢，试剂容易受到碱性磷酸酶的干扰等。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供一种加速腺苷脱氨酶反应，提高试剂稳定性的酶法检测腺苷脱氨酶的试剂。

本发明提供了一种酶法检测腺苷脱氨酶试剂盒，该试剂盒由下列试剂1和试剂2组成的：

试剂1：(3L)