[发明专利]蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白酶体β亚单位6（PSMB6）作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用。

背景技术

蚊可以传播多种疾病，危害人类健康。化学防治一直是蚊媒防制规划中的主要方法。然而连续，大量地使用杀虫剂导致蚊媒抗药性的发生和发展，抗药性已成为控制蚊媒传播疾病的最大障碍。蚊媒抗药性治理的前提在于早期发现抗药性和监测抗药性的发展。所以，抗药性检测一直是蚊媒防制研究的重点课题。寻找有效的抗药性检测靶标对于抗药性治理具有非常重要的意义。

本发明中的蛋白酶体是生物体内的一种巨型蛋白质复合物，主要作用是降解细胞不需要的或受到损伤的蛋白质。PSMB6是蛋白酶体降解蛋白质的一个催化亚基。

发明内容

本发明的目的是提供PSMB6的一种新用途。

本发明的技术方案是：PSMB6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用。

发明人利用二维电泳和蛋白质质谱分析的方法，发现PSMB6蛋白质在蚊对溴氰菊酯敏感细胞和抗性细胞中的表达有差异，在抗性细胞中高表达，为敏感细胞的1.60倍（p<0.05）。进一步的定量PCR试验验证了这一结果。PSMB6基因在蚊对溴氰菊酯抗性细胞中高表达（p<0.05）。结果表明，PSMB6可能与蚊溴氰菊酯抗性相关。

发明者为了进一步研究PSMB6在蚊对溴氰菊酯抗性中所起的作用，设计并合成了针对PSMB6基因的siRNA。用siRNA干涉PSMB6基因的表达后，检测在溴氰菊酯作用下抗性细胞的存活率。结果显示，干涉PSMB6后，抗性细胞的存活率较对照组显著下降（p<0.05），表明PSMB6可以影响蚊对溴氰菊酯的抗性。

PSMB6基因在蚊抗性细胞中较敏感细胞高表达；其编码的PSMB6在蚊抗性细胞中也较敏感细胞高表达；干涉PSMB6后，抗性细胞对溴氰菊酯的敏感性增加。结果表明，PSMB6与溴氰菊酯抗性相关。

本发明公开了通过检测蚊细胞中蛋白酶体β亚单位6的表达量来判断蚊对溴氰菊酯的抗性。具体是；以定量PCR检测待测品系和敏感品系的蛋白酶体β亚单位6基因表达，当待测品系的蛋白酶体β亚单位6基因的表达量大于或等于敏感品系的1.60倍时，待测品系对溴氰菊酯具有抗性。

发明者选取国内通用的实验室淡色库蚊敏感品系（LC50为0.02ppm）作为参照，以定量PCR检测PSMB6基因的表达。PSMB6基因的表达是敏感品系的1.60倍， 即可认定其对溴氰菊酯具有抗性。

取经世界卫生组织（WHO）推荐的标准方法鉴定的山东淡色库蚊敏感品系（LC50为0.02ppm）和抗性品系（LC50为0.55ppm），定量PCR检测PSMB6基因的表达。结果表明，其抗性品系PSMB6基因的表达是敏感品系的1.60倍（p<0.05）。 因此，PSMB6基因作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标可以理解。

本发明发现了一个蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标，对于蚊溴氰菊酯抗药性的早期发现和治理具有重要价值。

附图说明

图1是PSMB6在敏感和抗性蚊细胞中表达差异的二维电泳图。

图2是利用二维电泳图中PSMB6蛋白质点的灰度值作图，直观地反应PSMB6在敏感抗性细胞中的表达差异。

图3是定量PCR的方法验证PSMB6在敏感和抗性细胞中mRNA水平的表达。

图4是siRNA干涉PSMB6的表达后，CCK-8法检测抗性细胞存活率。

图5是定量PCR的方法验证PSMB6在山东敏感和抗性蚊中mRNA水平的表达。

具体实施方式

除非特别说明，本发明中所使用的术语，一般为本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

实施例1 PSMB6蛋白质在蚊溴氰菊酯抗性细胞中较敏感细胞高表达。

蚊敏感细胞购自中国军事科学院，在本实验室经溴氰菊酯逐代筛选，培养出抗性品系。抗性品系的LC50为1256.8mg/ml,是敏感品系的8.9倍（141.2mg/ml）。