[发明专利]30个陆地棉主栽品种的DNA指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，尤其是利用分子标记技术对品种进行DNA指纹图谱构建，实现了品种鉴别的简便、快速、准确。

背景技术

当前我国农作物种子纯度低劣状况普遍存在，各级农作物品种市定机构和种子生产部门对品种纯度鉴定日益重视，因此，采用高效、快速、准确的检测方法进行品种鉴定和纯度检测是十分必要的。上世纪八十年代兴起的基于DNA变异的各种分子标记技术，带动了DNA指纹图谱技术的快速发展。这种电泳图谱所揭示的多态性直接反序基因组DNA间的差异，不受环境影响，数量多、准确性高，具有高度的个体特异性和环境稳定性，被称为“DNA指纹图谱”，利用分子标记技术构建DNA指纹图谱是鉴别品种或品系的有力工具。目前，利用各种分子标记技术，许多重要作物如番茄、油菜、水稻、小麦、玉米、大豆等都进行了品种鉴定和纯度检测的研究，其中，番茄、水稻和小麦等主栽品种的SSR指纹图谱数据库已构建完成。棉花的指纹图谱构建研究已有一些报道。然而，一些研究由于处于分子标记发展的早期阶段，其用于指纹图谱构建的供试材料主要局限在较少的目标材料上，而且对本文涉及的30个棉花主栽品种未见相关报道。由于某一引物扩增到的等位基因数会随建库材料的增加而增加，利用有限试材进行指纹分析会导致引物多态信息量的降低，从而影响目标材料图谱的特异性。若在研究中增加了其他背景材料，一些目标材料的特异引物很可能就不是唯一的了。

本研究利用SSR分子标记技术，对在我国不同生态棉区曾经或正在种植的的30个棉花主栽品种，进行DNA指纹图谱分析，供试材料的遗传基础丰富且数量较多，利用各材料的特异引物或引物组合，以及20对核心引物的数字指纹代码，可简便、快速、准确地鉴别品种纯度及真伪，有效保护品种的知识产权和育种家的权益。

发明内容

以我国不同生态棉区曾经或正在种植的主要来源于岱字棉、斯字棉、福字棉、乌干达棉的30个陆地棉主栽品种为材料(表1)，从定位在棉花26条染色体上的2503对SSR引物(标记)中筛选到重复性好、多态性丰富的20对核心引物。20对核心引物的电泳结果表明，30个品种中有4个品种具有各自的特异引物，可将其与其它品种区分开，其中，中棉所64的特异引物有2个分别是NAU4903和DPL0209，辽棉19的特异引物有2个分别是NAU2251和NAU2092，泗棉4号的特异引物是NAU4903，鑫秋1号的特异引物是NAU1043(图1、图3)；其他26个品种可利用至少2对引物组合与其他品种区分开，如利用引物NAU2092/NAU1043可将冀棉958与其他品种区分开(图2、图3)；为更方便、准确地鉴别各品种，提高其与生产上其他品种的区分能力，构建了30个品种20对核心引物的十进制数字指纹代码(表2)。

表130个主栽品种的名称、系谱来源、生育期类型及审定年份

表230个主栽品种20对核心引物的十进制数字指纹代码

本发明创新之处

30个陆地棉主栽品种的DNA指纹图谱以前未见报道，特别是4个品种的特异引物、26个品种的引物组合，以及所有品种20对SSR核心引物的数字指纹未见报道。本发明首先筛选到用于棉花指纹图谱构建的20对SSR核心引物，通过电泳分析，将各品种的特异引物或引物组合指纹图谱与数字指纹信息相结合，大大提高了各品种与其他品种的鉴别能力，有效保护了品种的知识产权和育种家的权益。

附图说明

图1：1-30分别为表1中对应材料；箭头所指为7号品种辽棉19的特异引物NAU2092指纹图谱。

图2：1-30分别为表1中对应材料；箭头所指为20号品种冀棉958的引物组合指纹图谱；上图为引物NAU2092，下图为引物NAU1043。

图3：1-2：中棉所64的特异引物NAU4903、DPL0209；3-4：辽棉19的特异引物NAU2251、NAU2092；5：泗棉4号的特异引物NAU4903；6：鑫秋1号的特异引物NAU1043；7-8：中棉所12的引物组合NAU1255/NAU2251；9-10：中棉所41的引物组合NAU1043/NAU5104；11-12：中棉所45的引物组合。