[发明专利]一株对蚊子幼虫高效的苏云金芽孢杆菌

说明书

技术领域

本发明属卫生害虫的生物防治技术领域。本发明涉及一种对蚊子幼虫具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌菌株，涉及对编码杀蚊毒素的cry30基因全长核苷酸序列和cyt2基因全长核苷酸序列，以及分别由这两种基因编码的蛋白质氨基酸序列。

技术背景

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt，是一种分布极广的革兰氏阳性细菌，在稳定生长期Bt可形成伴孢晶体(parasporal crystal protein)，又称杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystal protein，ICP)，ICP对敏感昆虫有强烈的毒性，而对它们的天敌、人畜以及植物无害，被开发为生物农药广泛用于防治鳞翅目、双翅目、鞘翅目、直翅目等多种害虫(Schnepf E，Crickmore N，Van Rie，et al.Bacillus thuringiensis and its pesticidal crystal proteins[J].MicrobiolMol Biol Rev.，1998，62：775-806.)。

双翅目的蚊虫传播多种人类传染性疾病，如疟疾、乙型脑炎、丝虫病、黄热病、登革热等，对人类的健康造成了极大的危害(Masson L，Mazza A，Gringorten L，et al.Specificity domainlocalization of Bacillus thuringiensis insecticidal toxins is highly dependent on the bioassaysystem.Mol Mierobiol.1994，14：851-860.)据统计，由按蚊(Anopheles)传播的疟疾每年发病人数达3亿，并导致1亿人死亡；而每年亦有1.6亿人感染由库蚊传播的丝虫病、5千万人感染由白纹伊蚊传播的登革热(Budiansky S.Creatures of our own making.Science.2002，298：80-86.)。在过去的半个世纪中，大量地使用化学杀虫剂防治蚊虫，但带来了严重的弊端：蚊虫产生抗性，防治效果降低；破坏了生态平衡，也污染了环境，最终危害了人类的健康。人们逐渐认识到采取生物防治是包括蚊虫在内的害虫防治的必然趋势。Bt对白纹伊蚊属、库蚊属、按蚊属的多种蚊虫有很高的杀灭活性，其在蚊虫防治上的成功应用在一定程度上控制了虫媒病的传播。

1976年首次发现对蚊虫有很强杀虫活性的苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillusthuringiensis subsp.israelensis，Bti)，目前已发现多种亚种或血清型具有灭蚊活性，如Canadensisi亚种、Morrisoni亚种、Darmstadiensis亚种、Thompsoni亚种和Jegathesan亚种等。同时也发现了多种杀蚊晶体蛋白，如Cry2、Cry4A、Cry4B、Cry10A、Cry11A、Cry11Bb、Cry19A、Cry19B、Cry20Aa、Cry27A、Cry30、Cry40和Cyt等，陆续还不断有新杀蚊蛋白的相关报道(赵新民，夏立秋，王发祥，等.杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白研究进展[J].昆虫知识，2007，44(3)：336-342.)。Bti是研究时间较早、研究内容较深、应用范围较广的亚种，它作为生物杀蚊剂被广泛用于蚊虫的控制。野生Bt菌株WFS-97对白纹伊蚊幼虫的杀虫活性明显高于Bti，且杀虫基因不同，因此对于研究开发新的高效Bt杀蚊制剂具有非常重要的意义。

技术内容

本发明的目的是提供一种对蚊虫有高毒力的Bt菌株，以及两种新的cry30和cyt2基因序列，是一株生物杀蚊制剂候选菌株，也可以应用于构建工程菌。

本发明提供的Bt菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)，苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)WFS-97菌株。

上述苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)WFS-97，已于2010年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC №.3946。