[发明专利]山羊黄体细胞系的建立方法无效
| 申请号： | 201110008726.6 | 申请日： | 2011-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN102146358A | 公开（公告）日： | 2011-08-10 |
| 发明（设计）人： | 童德文;许信刚;李伟 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 山羊 黄体 细胞系 建立 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种山羊黄体细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原代培养和纯化：取妊娠6-8周的健康萨能奶山羊黄体，无菌条件下消化黄体组织，并把得到的黄体细胞接种到细胞培养瓶里，用DMEM/F12进行培养，所述DMEM/F12含有15％胎牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素；并置到37℃、5％CO2培养箱进行培养；等细胞长满培养瓶后进行传代，用柠檬酸-胰蛋白酶差速消化进行纯化；
(2)转染和筛选：对细胞纯度达到95％以上的原代黄体细胞利用脂质体转染人端粒酶逆转录酶基因，并用G418进行筛选2-3周，挑取单克隆并用组织细胞化学染色进行鉴定；
(3)扩大培养：对阳性细胞进行扩大培养，3天传代一次，分种率1∶2，待细胞传到30代时进行鉴定试验，并测定转染前后山羊黄体细胞的生长曲线。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)鉴定黄体细胞的方法：通过对细胞内3β-羟基类固醇脱氢酶活性染色，进行类固醇黄体细胞的鉴定，黄体细胞染色后在细胞核周围层深蓝色。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)用450μg/ml G418进行筛选。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西北农林科技大学，未经西北农林科技大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110008726.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
