[发明专利]一种提取DNA和RNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，具体的说，涉及一种提取DNA和RNA的方法。

背景技术

随着生物技术日新月异的发展，DNA和RNA的提取技术也日益成熟和发展，目前已有大量的技术广泛应用于实验室、工业生产、制药和动植物检疫领域，也产生了大量的相关专利，如“一种用于核酸分离的磁性纳米粒子复合物及其制法和应用(200610023144.4)”及“分离核酸的方法”(200680034578.2)等。

DNA和RNA在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。DNA和RNA的分离主要是指将DNA和RNA与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离DNA和RNA时应保证DNA和RNA分子一级结构的完整性，排除其他分子污染。但是由于由于DNA和RNA提取样品中含有碳水化合物、鞣酸、多酚及蛋白，甚至提取中使用的有机试剂如苯酚和氯仿，都会污染样品，因此如何取得高纯度的DNA和RNA，就成为所有研究者不得不面对的问题。

本发明的目的是提供一种提取DNA和RNA的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种从原核或真核生物来源材料中提取核酸，即DNA或RNA的方法。

本发明利用的是核苷酸分子磷酸基团带负电荷的特性而开发的，使用饱和食盐水中的正电荷中和上述磷酸基团的负电荷，然后沉淀分离，最后经过纯化，得到DNA或RNA。

具体的说，本发明所述的提取DNA或RNA的方法包括如下步骤：

1)预处理：裂解原核或真核生物材料并用去污剂进行溶解处理，得到裂解消化产物；

2)将饱和食盐水加入到裂解消化产物中，对生物材料中的蛋白进行沉淀处理；

3)分离沉淀相和液相，然后对液相中DNA或RNA进行分离和纯化。

其中，步骤2)所述的盐水为中性或酸性饱和盐水，若需要提取DNA，则使用中性饱和盐水；若需要提取RNA，则使用pH值5-6的酸性饱和盐水；

其中，所述饱和食盐水的体积用量为裂解消化产物体积的0.3-1倍；

所述中性饱和盐水是将NaCl直接溶解在纯水中煮沸制备；所述酸性饱和盐水是向中性饱和盐水加入盐酸得到的，使pH值达到5-6。

步骤2)如下进行：先在每毫升的裂解消化产物中加入350μl的中性饱和盐溶液；然后将上述溶液轻轻颠倒混匀，然后在室温下放置5-15min；

步骤3)可按照本领域公知的技术进行，例如可如下进行：将上述溶液在室温2500rpm离心15-30min，得含有DNA或RNA的上清液，然后对于含有DNA上清液采用下述方法：

1.沉淀DNA

1.1转移含DNA的上清至新的Eppendorf管；

1.2室温12000rpm离心10min，弃去上清；

2.洗涤DNA

2.1DNA沉淀加入75％乙醇；

2.2室温10000rpm离心5min，弃去上清；

3.溶解DNA

3.1室温条件下干燥DNA沉淀5min，然后溶于超纯水中；

3.2对获得的DNA进行定量并分装保存于-80℃。

4.去除RNA污染物

4.1每毫升的DNA溶液中加入50μg的RNase；

4.2 37℃温育1h。

注：去除RNA污染所使用的RNase处理法只能在提取的最后步骤中使用。如果需要脱盐得到高质量的DNA，RNase处理后可用本操作法之步骤3和4进行。若要长久保存DNA，可用Tris-EDTA(TE)溶液溶解DNA以抑制核酸酶活性。

对于含有RNA上清液采用下述方法：

1.RNA沉淀

1.1转移含RNA的上清至新的Eppendorf管；

1.2室温12000rpm离心10min，弃去上清；

2.RNA洗涤

2.1RNA沉淀加入75％乙醇；

2.2室温10000rpm离心5min，弃去上清；

3.RNA溶解

3.1室温条件下干燥RNA沉淀5min，然后溶于DEPC处理后的超纯水中；

3.2对获得的RNA进行定量并分装保存于-80℃。

4.去除基因组DNA污染物

此部分可用DNase I(无RNase)试剂盒进行操作，具体步骤参见制造商的说明书。

在步骤1)中，依据生物材料的来源和数量的不同，所述预处理可如下进行：

1)对于较为大量的生物材料，采用液氮研磨法并随后用去污剂进行溶解处理；