[发明专利]一种低聚木糖的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于定性或定量的检测低聚木糖中不同聚合程度的小聚体的方法。

背景技术

低聚木糖是指含有2-7个糖苷键聚合而成的化合物，它们常常与蛋白质或脂类共价结合，以糖蛋白或糖脂的形式存在。低聚木糖通常通过糖苷键将2～4个单糖连接而成小聚体，这类低聚木糖难以被胃肠消化吸收，甜度低，热量低，基本不增加血糖和血脂。低聚木糖并不能被人体的胃酸破坏，也无法被消化酵素分解。但它可以被肠中的细菌发酵利用，转换成短链脂肪酸以及乳酸。

目前，低聚木糖已经被广泛应用于各种医药制剂、口服液、食品和保健品中，其分离和纯化，是低聚木糖结构分析的关键。因为低聚木糖自身组成（低聚木糖中不同小聚体间分子量相差较小）、连接、衍生化、微观不均一性等方面的高度复杂性，使其检测具有很大困难。选择合适的方法，对收集到的混合糖链进行分离，是一项摸索性很强的工作。测定低聚木糖的方法很多,如薄层色谱法(Thin Layer Chromatography)、气相色谱法(Gas Chromatography)、高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis）和高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography)。其中，目前最常用且效果最好的为高效液相色谱法，其液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制。只要被分析物质在流动相溶剂中有一定溶解度，便可以分析。在常温下即可进行柱分离，毋须衍生化。特别对热稳定低的淀粉糖而言，该分析方法尤为适用。高效液相色谱对样品的回收比较容易，且是定量的，这对任何规模的制备目的特别有利。在很多场合，HPLC不仅是一种分析方法，更多的是作为分离手段，用以提纯和制备具有足够纯度的单一物质。在对低聚木糖的分离分析中，HPLC是最有效的手段之一。它减少了糖的损失和偶然误差，有良好的分离效果，灵敏度高、重现性好，能准确快速的定性、定量测定。另外，HPLC还可与质谱连用。HPLC分离出的各组分直接通过质谱进行结构分析，所以HPLC在低聚木糖的分离上具有重要用途。可是，目前现有的高效液相色谱检测方法不能清晰地分开各组分的色谱峰，检测灵敏度不高，不能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定性定量测定，在检测中存在较大误差，并且分离效果不好、检测重现性也不好。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的用于定性或定量的检测低聚木糖中不同聚合程度的小聚体的方法。

为达到上述目的，本发明采用的一种技术方案是：一种低聚木糖的检测方法，该方法是利用高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器相结合进行检测并记录色谱图，步骤如下：

（1）设定仪器工作条件：

①、高效液相色谱柱采用离子交换柱，柱温控制在5℃～75℃；

②、采用梯度洗脱法进行洗脱，具体如下：

第一阶段：0～15.00 min，流速：0.1～3.0 mL/min，洗脱流量为0.1～3.0 mL/min，洗脱液组成：氨水0.01wt%～2wt%，乙腈49.98wt%～50.99wt%，水48.02wt%～49wt%；

第二阶段：15.01～30.00min，流速：0.1～3.0 mL/min，洗脱流量为0.1～3.0 mL/min，洗脱液组成：氨水0.01wt%～2wt%，水98wt%～99.99wt%；

③、蒸发光散射检测器的漂移管的温度设定为50℃～130℃，载气流量为0.1 mL/min～3.0 mL/min；

（2）、配制待测溶液和进样：将待测的低聚木糖用水或乙醇溶解，得到浓度为0.005μg/mL～100mg/mL的低聚木糖待测液，以0.1μL～200μL的进样量将所述低聚木糖待测液进样至离子交换柱内，开始检测并记录色谱图；

（3）、结果表征：某个峰的出峰面积与所有出峰的面积总和的比值即为该峰所对应的低聚糖的含量。

根据本发明的一个具体实施例，所述蒸发光散射检测器的漂移管的温度设定为100℃。

本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明是采用高效液相色谱仪结合蒸发光散射检测器对低聚木糖进行检测，具有很高的检测灵敏度，且能够对低聚木糖中小聚体组分进行准确的定量测定，分离效果好、检测重现性好。

附图说明

图1为低聚木糖的检测图谱；

图2为洗脱梯度表1、检测数据分析表2以及检测的重现性结果表3（为连续进样7次的重现性RSD结果）。

具体实施方式

按照本发明所实施的一个优选实施例的分析检测方法如下：