[发明专利]检测农药的方法和装置无效
申请号: | 201110020436.3 | 申请日: | 2011-01-18 |
公开(公告)号: | CN102586399A | 公开(公告)日: | 2012-07-18 |
发明(设计)人: | 丁宁;梶浦尚志;李勇明 | 申请(专利权)人: | 索尼公司 |
主分类号: | C12Q1/46 | 分类号: | C12Q1/46 |
代理公司: | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人: | 贾静环 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 农药 方法 装置 | ||
1.一种检测农药的方法,包括如下步骤:
(a)提供待测样品;
(b)制备磁性纳米粒子,使胆碱酯酶与所述磁性纳米粒子接触,从而得到固定有胆碱酯酶的磁性纳米粒子;
(c)向步骤(a)的所述待测样品中加入步骤(b)中得到的固定有胆碱酯酶的磁性纳米粒子,并温育;
(d)用磁场富集磁性纳米粒子;和
(e)去除磁场,将富集的磁性纳米粒子分散在酶活性检测体系中,检测所述胆碱酯酶的酶活性,并通过酶活性来确定待测样品中农药的存在或其含量。
2.权利要求1的方法,其中所述农药为化学合成农药。
3.权利要求1的方法,其中所述农药选自下组:有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、有机氮类农药、拟除虫菊酯类农药、有机氯类农药和有机氟类农药。
4.权利要求3的方法,其中所述有机磷类农药选自下组:磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、磷酰胺、硫代磷酰胺、焦磷酸酯。
5.权利要求3的方法,其中所述有机磷类农药选自:草甘膦、乐果和马拉氧磷。
6.权利要求3的方法,其中所述氨基甲酸酯类农药选自下组:N-甲基氨基甲酸酯类和二甲基氨基甲酸酯。
7.权利要求3的方法,其中所述氨基甲酸酯类农药选自西维因和异丙威。
8.权利要求1-7中任一项的方法,其中所述磁性纳米粒子是通过选自下组的方法制备的:湿化学法、化学气相法和物理方法。
9.权利要求8的方法,其中所述湿化学法选自沉淀法、溶胶-凝胶法、微乳液及反相微乳液法、水热法和多元醇还原法;所述化学气相法选自化学气相沉积法、化学气相凝聚法和等离子蒸发法;所述物理方法选自蒸发冷凝法和磁控溅射方法。
10.权利要求1-9中任一项的方法,其中所述磁性纳米粒子是合金、铁氧体和金属间化合物的磁性纳米粒子。
11.权利要求1-10中任一项的方法,其中所述磁性纳米粒子是含铁、钴、镍及其合金的磁性纳米粒子,优选为Fe3O4的纳米粒子。
12.权利要求1-11中任一项的方法,其中所述磁性纳米粒子的表面含有极性基团,优选柠檬酸根或羟基。
13.权利要求1-12中任一项的方法,其中所述胆碱酯酶选自下组:乙酰胆碱酯酶、丙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶。
14.权利要求13的方法,其中所述乙酰胆碱酯酶从选自下组的来源获得:微生物、植物和动物,优选电鳗或电鳐。
15.权利要求1-14中任一项的方法,其中在步骤(b)之前还包括校准磁性纳米粒子的步骤,优选通过标准曲线进行。
16.权利要求1-15中任一项的方法,其中在步骤(b)之前还包括校准胆碱酯酶浓度的步骤,优选通过标准曲线进行。
17.权利要求1-16中任一项的方法,其中在步骤(b)之前还包括洗涤磁性纳米粒子的步骤,优选用去离子水洗涤1-5次,更优选洗涤4次。
18.权利要求1-17中任一项的方法,其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是通过选自下组的方法进行的:吸附法、化学交联法、共价键合法、物理包埋法、电化学聚合法和分子自组装。
19.权利要求1-18中任一项的方法,其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是在pH 6-8,优选pH 7的条件下进行的。
20.权利要求1-19中任一项的方法,其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上的过程中,加入胆碱酯酶与磁性纳米粒子的比例为20~330∶1U/g,优选125~320∶1U/g,更优选250~310∶1U/g,更优选280∶1U/g。
21.权利要求1-20中任一项的方法,其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是通过如下进行的:
(A)将磁性纳米粒子悬浮于去离子水或磷酸盐缓冲溶液中;
(B)将所述胆碱酯酶溶于含有牛血清白蛋白(BSA)的去离子水或磷酸盐缓冲溶液中;和
(C)将磁性纳米粒子溶液与胆碱酯酶溶液接触。
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