[发明专利]检测农药的方法和装置

权利要求书

1.一种检测农药的方法，包括如下步骤：

(a)提供待测样品；

(b)制备磁性纳米粒子，使胆碱酯酶与所述磁性纳米粒子接触，从而得到固定有胆碱酯酶的磁性纳米粒子；

(c)向步骤(a)的所述待测样品中加入步骤(b)中得到的固定有胆碱酯酶的磁性纳米粒子，并温育；

(d)用磁场富集磁性纳米粒子；和

(e)去除磁场，将富集的磁性纳米粒子分散在酶活性检测体系中，检测所述胆碱酯酶的酶活性，并通过酶活性来确定待测样品中农药的存在或其含量。

2.权利要求1的方法，其中所述农药为化学合成农药。

3.权利要求1的方法，其中所述农药选自下组：有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、有机氮类农药、拟除虫菊酯类农药、有机氯类农药和有机氟类农药。

4.权利要求3的方法，其中所述有机磷类农药选自下组：磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、磷酰胺、硫代磷酰胺、焦磷酸酯。

5.权利要求3的方法，其中所述有机磷类农药选自：草甘膦、乐果和马拉氧磷。

6.权利要求3的方法，其中所述氨基甲酸酯类农药选自下组：N-甲基氨基甲酸酯类和二甲基氨基甲酸酯。

7.权利要求3的方法，其中所述氨基甲酸酯类农药选自西维因和异丙威。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述磁性纳米粒子是通过选自下组的方法制备的：湿化学法、化学气相法和物理方法。

9.权利要求8的方法，其中所述湿化学法选自沉淀法、溶胶-凝胶法、微乳液及反相微乳液法、水热法和多元醇还原法；所述化学气相法选自化学气相沉积法、化学气相凝聚法和等离子蒸发法；所述物理方法选自蒸发冷凝法和磁控溅射方法。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述磁性纳米粒子是合金、铁氧体和金属间化合物的磁性纳米粒子。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述磁性纳米粒子是含铁、钴、镍及其合金的磁性纳米粒子，优选为Fe₃O₄的纳米粒子。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述磁性纳米粒子的表面含有极性基团，优选柠檬酸根或羟基。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述胆碱酯酶选自下组：乙酰胆碱酯酶、丙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶。

14.权利要求13的方法，其中所述乙酰胆碱酯酶从选自下组的来源获得：微生物、植物和动物，优选电鳗或电鳐。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中在步骤(b)之前还包括校准磁性纳米粒子的步骤，优选通过标准曲线进行。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中在步骤(b)之前还包括校准胆碱酯酶浓度的步骤，优选通过标准曲线进行。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中在步骤(b)之前还包括洗涤磁性纳米粒子的步骤，优选用去离子水洗涤1-5次，更优选洗涤4次。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是通过选自下组的方法进行的：吸附法、化学交联法、共价键合法、物理包埋法、电化学聚合法和分子自组装。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是在pH 6-8，优选pH 7的条件下进行的。

20.权利要求1-19中任一项的方法，其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上的过程中，加入胆碱酯酶与磁性纳米粒子的比例为20～330∶1U/g，优选125～320∶1U/g，更优选250～310∶1U/g，更优选280∶1U/g。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中在步骤(b)中将胆碱酯酶固定在磁性纳米粒子上是通过如下进行的：

(A)将磁性纳米粒子悬浮于去离子水或磷酸盐缓冲溶液中；

(B)将所述胆碱酯酶溶于含有牛血清白蛋白(BSA)的去离子水或磷酸盐缓冲溶液中；和

(C)将磁性纳米粒子溶液与胆碱酯酶溶液接触。