[发明专利]磺胺六甲氧嘧啶检测试剂盒、其制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物残留检测试剂盒，尤其涉及兽药磺胺六甲氧嘧啶检测试剂盒、及其制备方法和检测方法，属生物化学领域。

背景技术

磺胺六甲嘧啶（SMM）具有很强的抗菌和原虫感染的作用，被广泛地用于畜禽疾病的治疗和预防，并由于其对生长的促进作用又作为饲料添加剂在畜禽生产中被广泛地应用。所以它是残留问题最严重的兽药之一，由其导致的过敏、耐药菌株等问题己引起广泛关注。因此，从2005年起，农业部把畜产品中磺胺类药物的残留情况作为继盐酸克伦特罗之后的又一个重点予以监控。当人们长期食入含有此类药物的动物性食品时，低浓度的药物残留通过食物链向人类传播，诱导人类致病菌对其耐药性的增强，产生很多不良反应。包括①泌尿系统损害；②过敏反应；③造血系统损害（主要发生溶血）；④中枢神经系统反应；⑤此药可通过母体胎盘进入胎儿体内，造成新生儿黄疸。因此，磺胺类兽药在动物性食品中的残留问题已引起重视。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性食品中总磺胺以及单个磺胺的最高残留限量为0.1mg/kg，而日本规定不得检出。

国内外常用的对SMM检测方法有HPLC法和ELISA试剂盒，HPLC法费用高，前处理过程繁琐，不适应于大量样品的快速检测；ELISA试剂盒灵敏度相对不够高，检测限较低（一般到10^-9g/ml），不能满足某些低浓度物质含量测定的要求。因此，亟需一种高灵敏度、快速，且能准确可靠地进行定量分析的试剂盒。

发明内容

本发明目的在于设计一种高灵敏度、能快速且准确可靠地进行定量分析的新型磺胺六甲嘧啶检测试剂盒；另一目的在于提供其制备方法；又一目的在于提供其检测方法。

为实现本发明目的，本发明采用增强化学发光酶联免疫分析法检测磺胺六甲嘧啶的残留量，设计了磺胺六甲嘧啶增强化学发光酶联免疫检测试剂盒。

(一) 该检测试剂盒包括不透明微孔板和检测试剂，其特征在于，检测试剂由HRP-SMM酶标抗原、SMM标准品溶液梯度溶液、HRP-SMM样品稀释液、化学发光底液A、化学发光底液B、洗涤液组成，分别独立盛装于试剂瓶中；所述微孔板各孔包被浓度为2                                                磺胺六甲氧嘧啶的包被抗体；所述HRP-SMM酶标抗原是辣根过氧化物酶和磺胺六甲氧嘧啶偶联物; 所述SMM标准品溶液梯度溶液分别是：0.6pg/ml、1pg/ml、6pg/ml、60pg/ml、100pg/ml；所述HRP-SMM样品稀释液为0.05mol/L碳酸盐(CB) 缓冲液; 化学发光底液A是2×10^-5～1×10^-3mol/L 鲁米诺溶液、5×10^-5～1×10^-3 mol/L对羟基苯酚溶液和pH8.0的0.1mol/L Tris－HCl的混合溶液；化学发光底液B是2×10^-5～1×10^-3 mol/L过氧化氢溶液；洗涤液是含有质量百分比0.05%吐温-20的pH7.2 0.01mol/L磷酸盐（PBS）溶液。

所述碳酸盐缓冲液为碳酸钠和碳酸氢钠混合液；磷酸盐溶液为磷酸氢二钠溶液、磷酸二氢钠溶液混合液。

（二）磺胺六甲氧嘧啶检测试剂盒的制备方法通过如下方法实现：

（1）    配制HRP-SMM样品稀释液、洗涤液

HRP-SMM样品稀释液的配制：

碳酸钠                    1.59g

碳酸氢钠                  2.93g

加纯水至1000ml,过滤除菌，4℃保存。

洗涤液的配制：

吐温-20                 500 

加0.01mol/LPBS（pH7.2）至1000ml，过滤除菌，4℃保存。

0.01mol/LPBS（pH7.2）配方：

0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液（取Na₂HPO₄ .12H₂O 71.6g，加纯水至1000ml）

0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液（取NaH₂PO₄. 2H₂O  35.6g，加纯水至1000ml）