[发明专利]基于B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因的DNA疫苗及其用途

说明书

技术领域

本发明属于免疫学和分子生物学领域，涉及一种基于B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因的DNA疫苗及其用途。本发明还涉及一种B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因、该外毒素融合基因编码的外毒素融合蛋白、含有该外毒素融合基因的重组表达载体、以及含有所述重组表达载体的组合物。

背景技术

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和实体器官移植已广泛应用于恶性血液病、某些遗传性疾病、急性重度放射病、各种实体器官功能衰竭以及脏器恶性肿瘤等多种疾病的治疗上。由于供-受者间组织相容性抗原(MHC)的差异，当然还有其它诸多已知与未知因素如次要组织相容性抗原(mHA)、组织特异性抗原以及非免疫学因素等等，不可避免的要发生宿主抗移植物(HVGD)和移植抗宿主病(GVHD或GVHR)，这是导致同种异体组织器官移植失败与移植物慢性失功(GCD)的最重要、最根本的原因之一。随着急需器官移植患者人数的不断增加，供体缺乏的矛盾显得日加突出。无论是在现在还是将来，以不完全相合或者半相合移植的病例都将成为造血干细胞移植和器官移植的主流和方向。传统的防治方法是以破坏移植受体的全部免疫机能以至于丧失移植物抗白血病(GVL)、抗感染等作用为代价的，诸如使用大剂量多种免疫抑制剂或者去除移植物中全部T细胞。毫无疑问，解决GVHD和HVGD发生发展的根本出路或新的策略则在于能否有效地干预或抑制T细胞活化的始动环节，诱导特异性的免疫耐受，从而从根本上遏制“细胞因子风暴”的发生与发展。因此，一种理想高效的allo-HSCT和器官移植治疗还应同时包含修正或改良T细胞对异基因抗原的初始反应的策略，而不是去除移植受体内或供体移植物中所有的T细胞。也就是说，诱导对受体或供体的特异性免疫耐受仅是靶向性消除或抑制受体或供体T细胞对同种异基因抗原反应的能力，但仍保留该T细胞对其它抗原反应的正常功能。

业已证实，供、受体的T细胞在造血干细胞移植或器官移植中起着双重作用，既能够有助于造血干细胞或器官的植活、控制条件性感染以及抗白血病效应；同时也是导致GVHD或HVGD的根本原因。这一系列的免疫反应是通过T细胞的识别、活化而完成的。T细胞活化需要两种信号：与T细胞受体结合信号和CD28共刺激信号。第一信号受第二信号调控，导致T细胞活化、部分活化或无反应。因此，通过阻断T细胞受体信号或CD28介导的共刺激信号抑制T细胞活化是防治HVGD和aGVHD的重要策略。目前国际上主要采用CTLA4-Ig或B7抗体诱导特异性免疫耐受，达到防治HVGD和aGVHD的目的，并且已在大量体内、外动物实验的结果中得到证明。但其缺憾在于，所诱导的免疫耐受期限较短，且诱导无能的T细胞可经旁路重新激活，从而导致治疗失败；并且阻断所采用的单抗多为鼠源性，其产生的免疫原性会影响疗效。

因此，提供一种具有良好的免疫耐受与治疗性的治疗或预防同种异体组织/器官移植排斥反应诸如移植物抗宿主病的DNA疫苗是本领域技术人员急需解决的。

发明内容

本发明人经过大量的试验和创造性的劳动，发现了一种B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因，并且惊奇地发现，转染入真核细胞的重组表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)-B7-1-PE40KDEL经转录、翻译和翻译后修饰被分泌到胞外，pcDNA3.1/Zeo(+)-B7-1-PE40KDEL可在真核细胞中高效表达并且表达产物具有很好的靶向免疫抑制活性；发明人还发现，pcDNA3.1/Zeo(+)-B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因的DNA疫苗可以有效地预防和治疗(例如小鼠)移植物抗宿主病。由此提供了下述发明：

本发明的一个方面涉及一种B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

B7-1-PE40KDEL测定序列及开放阅读框分析如下：

SEQ ID NO：1的碱基序列：(1850个碱基)

CGTTTAACTT AAGCTTGGTA CCTGAGA CAGACACACT CCTGCTATGG GTACTGCTGC    60

TCTGGGTTCC AGGTTCCACT GGTGACGTTA TCCACGTGAC CAAGGAAGTG AAAGAAGTAG    120

CAACGCTGTC CTGTGGTCAC AATGTTTCTG TTGAAGAGCC GGCACAAACT CGCATCTACT    180