[发明专利]具有抗心肌细胞凋亡功能的蛋白、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体而言，本发明涉及一种具有抗心肌细胞 凋亡功能的蛋白及编码该蛋白的多核苷酸。本发明还涉及采用高表达效率的 表达系统表达该蛋白的制备方法以及该蛋白在制备心脏疾病药物中的用途。

背景技术

细胞凋亡(apoptosis)，又称程序性细胞死亡(programmed cell death， PCD)。作为细胞生命的基本特征之一，细胞凋亡是一个主动的、高度有序 的、由遗传基因控制及一系列酶参与的细胞主动死亡过程，是细胞在一定的 生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束生命的过程。

细胞凋亡对于多细胞有机体调控机体发育、维护内环境稳定、维持细胞 群体及恶性病变过程中均起重要作用，在保证多细胞生物的健康生存过程中 扮演着关键的角色。细胞凋亡是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施，许 多疾病的发生与细胞凋亡失控有着密切的联系。如神经退行性疾病及缺血性 心肌损伤就与细胞的过度凋亡有关。

心脏是由有丝分裂后的处于终末分化状态的心肌细胞组成的，即心肌细 胞不再进行分裂和增殖。这就意味着心肌细胞的损伤和死亡及由此造成的心 肌细胞数目减少在进化上并不能够通过有效的心肌细胞分裂和增殖来弥补。

心肌细胞的凋亡在成年人类心脏是一种正常的生理现象，有很多因素可 引起心肌细胞发生凋亡，包括氧化应激反应、缺血缺氧、血管紧张素II、Fas ligand、机械张力、肿瘤坏死因子-α、β-肾上腺素拮抗剂、抗肿瘤药蒽环霉素 等等。凋亡的心肌细胞参与心血管系统的许多生理和病理变化过程，是导致 多种心血管疾病发生和演变的重要细胞学基础。越来越多的证据表明，心肌 细胞凋亡与许多心脏疾病，如心肌梗塞、心力衰竭、原发性心肌病、心肌肥 厚以及抗肿瘤药物蒽环霉素诱导所致的心肌毒性等有密切的关系。不同的因 素可能通过不同的机制启动诱导心肌细胞凋亡的信号转导，激活凋亡的执行 器从而造成细胞凋亡。心肌细胞是失去了分裂能力的终末分化细胞，其细胞 周期的调节、促凋亡因子和抗凋亡因子的分布及凋亡的信号转导过程与有分 裂能力的细胞不同。目前已发现，心肌细胞至少存在有两条凋亡途径：一条 由Bad→细胞色素-C→caspase-9→caspase-3→PARP构成；另一条由caspase-6 和Lamin A构成。

目前，心血管疾病是人类健康和生命的主要威胁，是人类健康的头号杀 手，全世界范围内每年有一千七百万人死于心血管疾病，其死亡率已接近所 有癌症死亡率的总和。在我国，随着人民生活水平日益提高和饮食结构的改 变，心血管疾病死亡率呈明显上升趋势，已超过癌症成为第一大致死原因。 根据国家卫生部2004年底公布的最新统计结果表明，我国18岁及以上居民 高血压患病率为18.8％，估计全国患病人数1.6亿多，由此造成的心肌肥厚、 心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相关心脏疾病的病人达几千万。因 此，本领域迫切需要了解与抗心肌细胞凋亡相关的蛋白，并利用其作用特性， 将其改造成一个药物分子，或将其作为一个药物的“靶分子”应用到临床治 疗中，这必将带来巨大的经济效益和良好的社会效益。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种新型的具有抗心肌细胞凋亡 功能的蛋白。

本发明的另一个目的是提供编码上述蛋白的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供所述蛋白的制备方法及其用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。

一方面，本发明提供了一种具有抗心肌细胞凋亡功能的蛋白，所述蛋 白为包含SEQ.ID.NO：1所示氨基酸序列的多肽、其生物活性功能片段、 变体或衍生物。

优选地，所述蛋白为SEQ.ID.NO：1所示氨基酸序列的多肽。

另一方面，本发明提供了编码上述蛋白的多核苷酸以及与该多核苷酸 互补的多核苷酸。

在编码上述蛋白的多核苷酸中，该多核苷酸优选包含SEQ.ID.NO：2 所示的多核苷酸序列；进一步优选地，该多核苷酸为SEQ.ID.NO：2所示 的多核苷酸序列。

此外，本发明还提供包含上述多核苷酸的重组载体；优选地，所述重组 载体为本发明所提供的pPIC9K-Cardiac Salvation。