[发明专利]类风湿关节炎特异性抗原

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，特别涉及类风湿关节炎特异性抗原。

背景技术

类风湿关节炎(RA) 是一种以滑膜炎为基本病理改变, 以慢性破坏性关节病变为特征的全身性自身免疫病，大多病情呈进行性，最终导致关节纤维性或骨性强直而严重致残，严重影响患者生活质量。未经正确治疗的类风湿关节炎可迁延不愈, 甚至导致关节畸形。作为自身免疫性疾病，致病抗原驱动的自身反应性CD4⁺T细胞活化是类风湿关节炎发病的核心途径。

对于类风湿关节炎的诊断，现在主流仍然沿用1987 年美国风湿病学学会RA 的分类标准，其主要靠临床表现并排除其他关节炎从而对RA进行判断。另外，X线改变和类风湿因子也是判断RA的常用标准。但上述方法操作繁琐且特异性不高，且不适用于早期诊断。

众所周知，RA的病理改变从滑膜组织开始逐渐向软骨到骨发展。RA在早期若未得到有效治疗，将会引起关节功能障碍甚至劳动力丧失，并导致全身多脏器受累进而危及生命。如果能尽早对RA病情做出诊断，及早治疗，从而阻止或延缓其发展，将能有效的提高RA的治疗效果并减少其并发症的发生。而针对RA早期有高度敏感性和特异性的检测指标是实现RA早期诊断和治疗的前提。

早期诊断指标中，IL-8、IL-6水平在巨细胞病毒DNA阳性的类风湿关节炎患者中升高和CMV基因组出现之间存在联系，但特异性和敏感性低。在RA自身抗体作为检测指标方面：类风湿因子（RF）存在灵敏度低的缺点；在早期RF阴性的类风湿关节炎病人中可53.3% 的病人抗核周因子（APF）呈阳性，但APF抗原片的保存时间较短（仅为1～2周），检测稳定性低；Sa抗体在类风湿关节炎中阳性率为40%，特异性为98.9%，但类风湿关节炎早期仅约23%；过氧化物还原酶Ⅳ（在说明书附图中简称“Ⅳ”）和类风湿关节炎的相关性研究尚未有人报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种过氧化物还原酶Ⅳ的新应用，该应用是通过在RA滑膜组织中筛选出RA备选抗原，再在备选抗原中筛选出过氧化物还原酶Ⅳ并对其抗体在初诊和复诊RA患者血清中通过间接ELISA进行特异性和敏感性检测，过氧化物还原酶Ⅳ主要表达于RA病变起始部位滑膜细胞胞浆，过氧化物还原酶Ⅳ体外特异性刺激RA患者外周血单个核细胞（PBMC）增殖并分泌RA发病相关细胞因子IL-17、TNF-α和IFN-γ，所以过氧化物还原酶Ⅳ是新的RA疾病相关抗原，该抗体检测的新应用在初诊RA患者血清当中特异性和敏感性高，为类风湿关节炎的早期诊断及治疗提供了新思路。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

过氧化物还原酶Ⅳ在制备类风湿关节炎特异性抗原中的应用。

进一步，所述过氧化物还原酶Ⅳ在制备类风湿关节炎诊断试剂中的应用；

进一步，所述过氧化物还原酶Ⅳ在制备类风湿关节炎早期诊断试剂中的应用；

进一步，过氧化物还原酶Ⅳ在制备类风湿关节炎疫苗中的应用。

本技术方案分别利用免疫蛋白组学方法在RA滑膜中筛选出RA备选抗原及抗体，通过TOF-TOF质谱法及免疫蛋白印迹（Western Blotting）法进一步鉴定和验证备选抗原中的五号蛋白点为过氧化物还原酶Ⅳ；利用Western-blot检测RA和骨性关节炎（OA）滑膜组织中过氧化物还原酶Ⅳ表达差异；通过免疫组织化学染色方法证实过氧化物还原酶Ⅳ主要表达于RA起始病变部位滑膜细胞胞浆；借助间接法ELISA测定过氧化物还原酶Ⅳ抗体在RA血清中的特异性和敏感性；并发现过氧化物还原酶Ⅳ抗体滴度在初诊的早期RA患者（病程少于3个月）中明显高于正常人，并且高于经免疫抑制治疗的复诊RA患者；通过细胞增殖实验证实了过氧化物还原酶Ⅳ特异性刺激RA外周血单核细胞增殖，并分泌IL-17、TNF-α和IFN-γ等与RA发病相关细胞因子。根据上述结果，本发明得出如下结论：过氧化物还原酶Ⅳ为RA特异性疾病相关抗原。在上述研究基础上针对过氧化物还原酶Ⅳ抗原进行改造等方式制备疫苗可能为RA的特异性免疫治疗提供新的手段。

 

本发明的有益效果在于：过氧化物还原酶Ⅳ在制备类风湿关节炎特异性抗原中的应用中，其特异性和敏感性高，尤其适用于早期诊断试剂的应用，过氧化物还原酶Ⅳ还为制备类风湿关节炎疫苗中提供了新思路。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中：

图1为RA滑膜组织蛋白点2-D分离后Coomassie blue染色双向凝胶电泳图。