[发明专利]南瓜耐旱基因CmNAGS及其抗除草剂植物表达载体

权利要求书

1.南瓜耐旱基因CmNAGS，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO.1。

2.南瓜耐旱基因CmNAGS抗除草剂植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的南瓜耐旱基因CmNAGS与植物表达载体构成。

3.根据权利要求2所述的南瓜耐旱基因CmNAGS抗除草剂植物表达载体，其特征在于所述的南瓜耐旱基因CmNAGS抗除草剂植物表达载体是将南瓜耐旱基因CmNAGS经Sac I和Xba I双酶切后插入到中间载体pCAMBIA3301-T800的Sac I和Xba I位点得到。

4.权利要求3所述的南瓜耐旱基因CmNAGS抗除草剂植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1)南瓜耐旱基因CmNAGS的克隆

以提取的南瓜幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为cDNA；以所述的反转录的cDNA为模板，设计上游引物YWNMBs2：SEQ ID NO.5，下游引物YWNMSa2：SEQ ID NO.6，用高保真酶PCR扩增得到上、下游分别引入Sac I和Xba I酶切位点的CmNAGS基因，所述的PCR产物CmNAGS基因连接到pMD19-T克隆载体，转化DH5α感受态细胞，进行序列测定；

2)中间载体pCAMBIA3301-T800的改造

全序列合成含有CaMV35S启动子、多克隆位点、Nos终止子的T800片段：SEQ ID NO.2，其中，CaMV35S启动子的上游和Nos终止子的下游分别引入了EcoR I和Hind III酶切位点；EcoR I和Hind III双酶切pCAMBIA3301和所述的T800片段，回收11289bp的pCAMBIA3301大片段和849bp的T800DNA小片段，连接所述两个片段得到中间载体pCAMBIA3301-T800，产物转化DH5α感受态细胞，提取质粒，进行酶切验证；

3)植物表达载体pCAMBIA3301-T800-CmNAGS的构建

分别用Sac I和Xba I双酶切步骤1)得到的插入CmNAGS基因的pMD19-T和pCAMBIA3301-T800质粒，回收1854bp的CmNAGS基因片段和12138bp的质粒pCAMBIA3301-T800大片段，连接所述两片段，连接产物转化DH5α感受态细胞，提取质粒，进行酶切验证，得到所述的南瓜耐旱基因CmNAGS抗除草剂植物表达载体pCAMBIA3301-T800-CmNAGS。