[发明专利]淡水鱼气单胞菌二联灭活疫苗及制备方法

权利要求书

1.一种淡水鱼气单胞菌二联灭活疫苗，其特征在于，所述疫苗包括以下灭活抗原组合物：嗜水气单胞菌培养物灭活液和温和气单胞菌培养物灭活液。

2.根据权利要求1所述的淡水鱼气单胞菌二联灭活疫苗，其特征在于：所述嗜水气单胞菌培养物灭活液占50%，其中细菌浓度不少于25亿cfu/ml；所述温和气单胞菌培养物灭活液，占50%，其中细菌浓度不少于25亿cfu/ml。

3.如权利要求1所述的淡水鱼气单胞菌二联灭活疫苗的工厂化制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. 一级种子制备：嗜水气单胞菌菌种或温和气单胞菌菌种接种营养琼脂平板，28℃培养，24小时，挑菌苔接种营养肉汤培养基，28℃，摇瓶培养18小时，制备一级种子液；

b.  二级种子制备：将一级种子液接种50L发酵罐，培养基为产毒素培养基，28℃，30-60L/min的通气量，搅拌通气培养10-16小时，制备二级种子液；

c. 制苗菌液培养：将二级种子液接种500L发酵罐，培养基为产毒素培养基，28℃，150-200L/min的通气量，搅拌通气培养10-14小时，得到制备疫苗的菌液，活菌数50亿cfu/ml以上为合格；

d. 灭活：菌液加入0.35%甲醛液，37℃，灭活24小时，进行无菌检验和甲醛残留检验合格，得到嗜水气单胞菌培养物灭活液或温和气单胞菌培养物灭活液；

e. 配苗：分别将两种细菌培养物灭活液按1：1的比例输入配苗罐，罐内混合液搅拌均匀；

f. 分装：无菌条件下进行分装、轧盖、得到淡水鱼气单胞菌二联灭活疫苗成品。