[发明专利]一种慢病毒载体及其介导的分泌脑源性神经营养因子的骨髓间充质干细胞系的制备方法无效
| 申请号： | 201110026535.2 | 申请日： | 2011-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN102174578A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 张琰;李筱荣;王飞;孙国玲 | 申请（专利权）人： | 天津医科大学眼科中心 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12R1/91 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 宋洁瑾 |
| 地址： | 300384 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 载体 及其 分泌 脑源性 神经 营养 因子 骨髓 间充质干 细胞系 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达分泌型人脑源性神经营养因子的慢病毒表达载体。
2.一种慢病毒载体介导的分泌BDNF的骨髓间充质干细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)慢病毒表达载体的构建：利用PCR的方法，扩增人BDNF的cDNA序列，扩增后的人BDNF克隆入慢病毒表达载体，重组慢病毒表达载体命名为lenti-BDNF；
(2)用优化参数的磷酸钙转染法包装慢病毒，并用超速离心法浓缩病毒颗粒，测定包装病毒的滴度；
(3)用包装后的慢病毒颗粒，用逆转染法转导人骨髓间充质干细胞。
3.根据权利要求2所述慢病毒载体介导的分泌脑源性神经营养因子的骨髓间充质干细胞系的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)用优化参数的磷酸钙转染法包装慢病毒是指：利用磷酸钙法转染293T细胞，2X转染缓冲液的pH值7.07-7.13，转染后4-7小时换液，换液后48-60小时收集细胞上清液，再用细胞上清液转导人骨髓间充质干细胞系。
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