[发明专利]猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。

背景技术

痘病毒基因组结构庞大，大的基因组为很多外来基因的插入提供了空间，作为载体能够接纳大量的外源基因，并使其有效表达(Barbara E.Straw，Jeffery J.Zimmerman，Sylvie D’Allaire，David J.Taylor..DISEASES OF SWINE.9^TH EDITION.[M])。痘病毒还有良好的免疫原性，能激发宿主产生有效的免疫反应。猪痘病毒不感染其他动物，只感染猪，在猪体只产生温和性反应，使用比较安全。因此，猪痘病毒是给猪传递免疫原的一种较为理想的载体。重组猪痘病毒疫苗具有弱毒疫苗的抗原增殖能力，使用方便，成本低廉。所以，猪痘病毒是猪专有的基因工程活载体疫苗颇具魅力的候选载体。猪流感(Swine influenza，SI)是由A型流感病毒引起的一种猪的急性呼吸道传染病。虽然单纯的猪流感病毒感染表现为发病率高(100％)，死亡率低(约5％)，但猪流感病毒在体内可以感染肺泡巨噬细胞(Jung T，Chol C，Chae C.Localization of SwineInfluenza Virus in Naturally Infected Pigs[J].Vet Pathol，2002，39：10-16.)。肺泡巨噬细胞受损严重影响肺部免疫防御机制，容易引起其它病原菌和病毒的继发感染。另外，由于猪呼吸道上皮细胞既有禽流感病毒又有哺乳动物及人流感病毒的受体，猪成为流感病毒基因发生重组的关键场所(Scholtissek C.Pigs as the“mixing vessel”for the creation of new pandemic influenza A viruses [J].MedPrinc Pract，1990，2：65-71)，在流感病毒的生态学和流行病学中占据重要的地位。目前欧美市场猪流感疫苗是全病毒灭活疫苗，对预防猪流感发挥了重要的作用。但灭活疫苗诱导细胞免疫的能力弱，对异源和异型病毒不能提供有效保护，很难有效控制抗原多变的猪流感病毒在猪群中的感染与传播。

猪流感病毒H3N2(A/swine/Guangxi/1/2004(H3N2))毒株(GenBank收录号为FJ157986)是我国猪群中流行的优势毒株(祁贤.我国部分地区猪流感病毒分子流行病学及致病性研究，南京农业大学博士论文.2006.6，112-130)，HA1蛋白是猪流感病毒的主要表面抗原，可诱导机体产生保护性中和抗体，可用来抵御猪流感病毒的感染。目前还没有构建成猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种猪流感病毒H3N2亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H3。

本发明的另一目的是提供猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒。

本发明的又一目的是提供该重组猪痘病毒的制备方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种猪流感病毒H3N2亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H3，该重组载体是将序列为SEQID NO.1所示的猪流感病毒H3N2毒株HA1基因序列插入猪痘病毒载体pUSZ11的Kpn I和BamH I酶切位点所得。

一种猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒，是由猪痘病毒和所述的转移载体pUSZ11/H3感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得的阳性克隆。

其中，所述的猪痘病毒优选ATCC保藏号为VR-363^TM的野生型猪痘病毒wtSPV。

所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒rSPV/H3于2011年1月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：V201103。该重组猪痘病毒rSPV/H3在分类上属于：痘病毒科(Poxviridae)，猪痘病毒属(Suipoxvirus)，猪痘病毒(Swinepox virus)。

猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的制备方法，包括如下步骤：

(1)根据GenBank收录号为FJ157986的猪流感病毒H3N2(A/swine/Guangxi/1/2004(H3N2))毒株HA1的基因序列，自行设计并合成序列为SEQ ID NO.1所示的HA1基因；