[发明专利]中国人群耳聋基因筛查用试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种中国人群耳聋基因突变热点的筛查试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下内容：

(1) PCR反应试剂，包括dNTP、5×和10×PCR缓冲液、Mg²⁺离子、FastTaq酶、SNaPshot Multiplex 混合液；

(2) 等比例混合的针对耳聋基因6个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物；

 (3) 按一定比例混合的针对耳聋基因7个突变热点的PCR延伸引物；

(4) 纯化试剂，包括SAP酶、Exon I酶及其配套的缓冲液；

(5) 对照标本，包括单个位点纯合、杂合突变的阳性对照标本、阴性对照标本,

所述试剂盒以GJB2基因235位点的delC和299-300位点delAT，SLC26A4基因2168位点的A→G突变和IVS7-2位点的A→G突变，线粒体DNA基因1555位点的A→G突变、3243位点的A→G突变和7445位点A→G突变共7个突变热点为检测对象，针对每个位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的位点同时进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，一次获得7个位点的基因型。

2.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述GJB2基因235位点的扩增引物序列是ATGCTTGCTTACCCAGAC和GATCTCCTCGATGTCCTTA。

3.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述GJB2基因299位点的扩增引物序列与所述235位点的扩增引物序列一致。

4.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述SLC26A4基因2168位点的扩增引物序列是GCCTGGGCAATAGAATGAGACT和CCCTCTTGAGATTTCACTTGGT。

5.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述SLC26A4基因IVS7-2位点的扩增引物序列是ACAAAATCCCAGTCCCTATTCCTA和TATGGTTGTTTCTTCCAGATCACA。

6.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述线粒体DNA基因1555位点的扩增引物序列是AAAACTACGATAGCCCTTATGAAAC和AGTGTAAGTTGGGTGCTTTGTGTT。

7.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述线粒体DNA基因3243位点的扩增引物序列是GGAGTAATCCAGGTCGGTTTCTATC和TGGCGTCAGCGAAGGGTTGT。

8.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述线粒体DNA基因7445位点的扩增引物序列是ATCTAACTTTCTTCCCACAACACTT和AATGGTTTTTCTAATACCTTTTTGA。

9.如权利要求1所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，内装等比例混合的针对耳聋基因8个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物, 及按一定比例混合的针对耳聋基因14个突变热点的PCR延伸引物,

所述试剂盒以GJB2基因35位点delG、109位点G→A突变、176-191位点缺失16个碱基、235位点delC和299-300位点delAT，SLC26A4基因1174位点的A→T突变、1229位点的A→G突变、2027位点的T→A突变、2168位点的A→G突变和IVS7-2位点的A→G突变，线粒体DNA 1494位点的C→T突变、1555位点的A→G突变、3243位点的A→G突变和7445位点A→G突变共14个位点为检测对象，针对每个位点的突变类型分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的区段同时进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，一次获得14个位点的基因型。

10.如权利要求9所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述GJB2基因35位点的扩增引物序列与所述235位点的扩增引物序列一致。

11.如权利要求9所述的用于筛查中国人群耳聋基因的试剂盒，其特征在于，所述GJB2基因109位点的扩增引物序列与所述235位点的扩增引物序列一致。