[发明专利]从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取脱氧核糖核酸的方法有效
申请号: | 201110027550.9 | 申请日: | 2011-01-25 |
公开(公告)号: | CN102146112A | 公开(公告)日: | 2011-08-10 |
发明(设计)人: | 韩典霖;俞萍;李晓晨;孙克非 | 申请(专利权)人: | 天根生化科技(北京)有限公司 |
主分类号: | C07H21/04 | 分类号: | C07H21/04;C07H1/08 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 罗文群 |
地址: | 100192 北京市海淀区西*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 福尔马林 固定 石蜡 包埋 组织 提取 脱氧核糖核酸 方法 | ||
1.一种从福尔马林固定的石蜡包埋的组织中提取脱氧核糖核酸的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
(1)将2~4片10微米厚的石蜡包埋组织切片放在500微升、摩尔浓度为0.1的氢氧化钠溶液中,再加入50微升、质量百分比浓度为20%的十二烷基硫酸钠和50微升、摩尔浓度为0.001的二硫苏糖醇,充分混匀,100℃下孵育30分钟,得到裂解液;
(2)对上述裂解液进行离心分层,离心分层的转速为1,3200转/分钟,离心分层时间为5分钟,取出离心分层后的中间层,加入500微升无水乙醇,充分振荡混匀,得到混合液;
(3)将上述混合液加入硅膜吸附柱中,进行离心吸附,离心吸附的转速为8000转/分钟,离心吸附时间为3分钟,倒去废液;
(4)向上述步骤(3)硅膜吸附柱中加入500微升去蛋白缓冲液,进行离心去蛋白,离心去蛋白的转速为8000转/分钟,离心去蛋白的时间为3分钟,倒掉废液;
(5)向上述步骤(4)的硅膜吸附柱中加入700微升去盐漂洗液,进行离心去盐,离心去盐的转速为8000转/分钟,离心去盐时间为3分钟,倒掉废液;重复该步骤一次;
(6)对上述步骤(5)的硅膜吸附柱进行离心干燥,离心干燥的转速为1,2000转/分钟,离心干燥时间为2分钟;
(7)向步骤(6)的硅膜吸附柱中加入50微升洗脱缓冲液,室温下放置2~5分钟后,进行洗脱离心,洗脱离心的转速为1,2000转/分钟,洗脱离心的时间为2分钟,得到脱氧核糖核酸溶液。
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