[发明专利]一种土贝母苷甲的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药活性成分分离制备领域，具体而言，本发明涉及一种从土贝母中分离制备土贝母苷甲的方法。

背景技术：

土贝母苷甲(Tubeimoside A)是从葫芦科植物土贝母(Bolbostemma paniculatum)提取分离得到的皂苷，是土贝母的主要有效成分之一。分子式：C₆₃H₉₈O₂₉，分子量：1319.43。经药理试验表明，其具有抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种活性。土贝母苷甲在植物中含量较高，魏有良等采用HPLC法测定不同产地土贝母中土贝母苷甲含量，流动相为65％的甲醇，流速1.0ml/min，检测波长214nm；得到拟野生条件下种植土贝母与市售饮片土贝母中的土贝母苷甲的含量分别为1.776％和1.009％。李晓晶等采用HPLC法研究并建立各产地土贝母药材的指纹图谱(土贝母的HPLC指纹图谱研究.中草药.2007，38(6)：926-929.)，采用70％乙醇加热回流提取，乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取制备供试品溶液。目前尚未见有土贝母苷甲制备的专利报道和详细研究，故本发明提供了一种土贝母苷甲的制备方法。

发明内容：

本发明旨在提供一种土贝母苷甲的制备方法。该方法避免使用正丁醇，保证了土贝母苷甲的收率和纯度。

本发明采用的技术方案如下：

1)将市售土贝母饮片或新鲜采集的土贝母鳞茎作为原料，选用水、甲醇、乙醇或它们中的两种混合溶剂提取；

2)将1)中提取得到的提取物经过聚酰胺柱层析、Sephadex LH-20柱层析、中压氧化铝柱层析的一种或多种方式分离，用水、乙腈、乙醇、二氯甲烷、甲醇、氯仿或它们的至少两种混合物作洗脱剂进行洗脱；

3)合并2)中的洗脱液，回收试剂，干燥；

4)将3)中所得干燥物用丙酮洗涤多次，干燥即得产品。

所述步骤1)中提取溶剂用量为原料量的4-20倍。

所述步骤1)中提取是在溶剂浸泡后，采用加热提取、超声提取、渗漉提取中的一种，提取1-3次。

所述步骤2)中聚酰胺柱层析洗脱剂可选60-80％乙醇水溶液或20-50％乙腈水溶液。

所述步骤2)中Sephadex LH-20柱层析为常压或中压柱层析，洗脱剂可选60-80％乙醇水溶液或20-50％乙腈水溶液。

所述步骤2)中中压氧化铝柱洗脱剂可选二氯甲烷-甲醇或氯仿-甲醇，按100∶1、50∶1、20∶1、5∶1梯度洗脱。

本发明的特点在于本发明解决了由于使用正丁醇、硅胶柱层析导致土贝母苷甲的纯度不高、收率低的问题，本发明制备的土贝母苷甲的纯度高于90％，且操作简单，可扩大工业化生产。

具体实施方式：

实施例1：

土贝母饮片5kg，粉碎过20目筛，加15L50％乙醇浸泡5小时后，加50％乙醇至30L加热回流提取，过滤，药渣再同样回流提取2次，过滤，合并提取液，减压回收乙醇至25L；将提取液通入预处理好的聚酰胺柱中(8L，20-50目)，先用3BV水洗脱，再用80％乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加200g氧化铝烘干，加入中压氧化铝柱中，先用水洗脱至无色，再依次用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，由高到低，依次按100∶1、50∶1、20∶1和5∶1，分段收集，收集有效成分段，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲35g，HPLC检测其纯度为90.9％。

实施例2：

土贝母饮片8kg，粉碎过20目筛，加32L60％乙醇浸泡3小时后，加60％乙醇至80L渗漉提取，药渣再同样渗漉提取1次，过滤，合并提取液，减压回收乙醇至40L；将提取液通入预处理好的Sephadex LH-20层析柱中(15L，20-50目)，先用3BV水洗脱，再用65％乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加300g氧化铝烘干，加入中压氧化铝柱中，先用水洗脱至无色，再依次用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，由高到低，依次按100∶1、50∶1、20∶1和5∶1，分段收集，收集有效成分段，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲58g，HPLC检测其纯度为92.5％。

实施例3：