[发明专利]一种超临界流体萃取穗花杉双黄酮的方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药有效成分分离技术领域，具体而言，涉及一种超临界流体萃取穗花杉双黄酮的方法。

背景技术：

卷柏，又名九死还魂草，是卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring或垫状卷柏Selaginella pulvinata(Hook.et Grev.)Maxim.的干燥全草。在我国主要分布在广东、广西、福建、台湾、浙江、江苏、江西、湖南等地。春秋两季均可采集，药源丰富。卷柏具有清热解毒、活血化瘀、止血抗癌、防癌治癌、抗炎、抗病毒、抗感染、抗过敏、镇痛、催眠、降血压、降血糖、增强人体免疫功能等功效，临床上用于治疗闭经、吐血、尿血、便血、崩漏、脱肛、跌打损伤、腹痛、哮喘等。其主要的化学成分有黄酮类、生物碱类、苯丙素类、酚类、有机酸类等化合物，其中黄酮类化合物为其主要活性成分，如芹菜素(apigenin)、穗花杉双黄酮(amentoflavone)、扁柏双黄酮(hinokiflavone)及异柳杉素(isocryptomerin)等。

自1971年Masayoshi Okigawa等从卷柏中分出穗花杉双黄酮以来，相继有50余种双黄酮类成分从本属分离得到，其中均含有穗花杉双黄酮，且含量最高。穗花杉双黄酮分子式C₃₀H₁₈O₁₀，分子量：538.46，熔点256℃，淡黄色粉末，易溶于甲醇、乙醇和丙酮。

穗花杉双黄酮具有细胞毒活性、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、血管舒张、保护神经作用等生理活性，是卷柏类药材的特征性成分，在化妆品、保健品和医药领域有着广阔的前景。在很多种中草药如银杏叶、贯叶连翘中均存在，而卷柏中穗花杉双黄酮的含量远远高于其他中草药。贯叶连翘中穗花杉双黄酮的质量分数在0.01-0.05％，卷柏中穗花杉双黄酮的质量分数却高达0.8％(李五洲，等.高效液相色谱法测定卷柏中的穗花杉双黄酮.日用化学工业.2004，34(2)：121-122)。

目前穗花杉双黄酮主要采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析、Sephadex LH-20等传统分离方法，有机溶剂用量大、步骤繁琐、污染环境、提取时间短、提取率低。

发明内容：

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种超临界流体萃取穗花杉双黄酮的方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案予以实现：

一种超临界流体萃取穗花杉双黄酮的方法，其特征在于方法步骤如下：

a.将干燥的卷柏粉碎，置于超临界流体萃取釜中；

b.将卷柏粉末进行超临界CO₂萃取，体积百分比浓度70-100％的乙醇或丙酮做夹带剂，采用连续泵输入夹带剂，萃取条件：萃取釜压力为23-38MPa，解析釜压力为6-10MPa；萃取釜温度为35-50℃，解析釜温度为20-40℃；CO₂流量控制在22-35L/h；夹带剂加入量是萃取物料量的5-25％；经过3-6h的萃取，解析得到萃取物；

c.采用加热回流方法溶解萃取物，溶解溶剂为60％的乙醇溶液，过滤，滤液通过预处理好的聚酰胺柱，先用水洗脱，再用氯仿-丙酮-甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，放置析出，得到粗晶；

d.将粗晶用80-90％乙醇水溶液回流溶解重结晶，干燥，即得成品。

所述步骤c中氯仿-丙酮-甲醇混合溶剂体积比为6-9∶3-5∶1-3。

本发明与现有技术相比的有益效果是：

(1)超临界CO₂萃取温度低，能完好保留有效成分不被破坏，生产周期短；

(2)聚酰胺柱层析，混合溶剂洗脱，分离效果好。

具体实施方式：

实施例1：