[发明专利]密码子优化的猪CD40L基因及表达其编码蛋白的重组杆状病毒的制备方法有效
| 申请号： | 201110029283.9 | 申请日： | 2011-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN102154306A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 郑其升;薛刚;侯继波 | 申请（专利权）人： | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/63;C12N7/01 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 王荷英 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 密码子 优化 cd40l 基因 表达 编码 蛋白 重组 杆状病毒 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种密码子优化的猪CD40L基因，其特征在于包括SEQ ID NO：3所示的序列。
2.根据权利要求1所述密码子优化的猪CD40L基因，其特征在于其序列如SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求1所述密码子优化的猪CD40L基因，其特征在于其序列如SEQ ID NO：4所示。
4.根据权利要求1所述密码子优化的猪CD40L基因，其特征在于其序列如SEQ ID NO：5所示。
5.一种表达权利要求2或3或4所述基因编码的猪CD40L蛋白的重组杆状病毒的制备方法：
(1)将所述基因与质粒pFast Dual相连，构建重组质粒；
(2)将所述重组质粒转化入DH10Bac，通过蓝白斑筛选获得卡那霉素、四环素、庆大霉素抗性的重组DH10Bac；
(3)将所述重组DH10Bac转染sf-9细胞获得重组杆状病毒。
6.根据权利要求5所述的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于所述重组杆状病毒表达的猪CD40L蛋白经SDS-PAGE电泳，图谱上出现分子量约为28kD的蛋白；经Western-blot试验，显示：在28kD左右出现能够与兔抗猪CD40L多克隆抗体结合的特异性条带。
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