[发明专利]一种生产静注人免疫球蛋白的方法

权利要求书

1.一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于：以人血浆为原料，采用压滤法分离结合层析法纯化生产静注人免疫球蛋白，生产操作压力为0.05～0.3MPa，主要包括以下生产步骤：

(a)从血浆中分离组分I+II+III；

(b)从组分I+II+III沉淀分离组分I+III；

(c)分离组分II；

(d)层析法纯化；

(e)病毒灭活；

(f)配制静注人免疫球蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤(a)所述的从血浆中分离组分I+II+III，是按以下步骤进行的：从血浆中分离组分I+II+III：将冷冻血浆在不高于37℃的条件下融化，调整温度在1～4℃之间，或者把新鲜血浆直接调整温度在1～4℃之间，用pH值为4.0的醋酸缓冲液调节血浆pH值到5.8～6.2，加入浓度为95％的乙醇，使血浆中乙醇的最终浓度为20％～22％，使反应液的最终温度为-4～-6℃，用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液入另一个反应罐，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分I+II+III沉淀。

3.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤(b)所述的从组分I+II+III沉淀分离组分I+III，是按以下步骤进行的：从组分I+II+III沉淀分离组分I+III：将组分I+II+III沉淀溶解于4～6倍量预冷0～2℃的注射用水中，搅拌3小时以上，制冷反应液使其温度维持在0～2℃，搅拌至溶解。加入醋酸缓冲液，调节反应液pH值为5.1～5.4，向反应液加入95％的乙醇，使反应液乙醇的最终浓度为17％～19％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，使其最终温度为-4.5～-5.5℃，继续搅拌1小时，用压滤机进行加压过滤。过滤后的清液入另一个反应罐，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分I+III，冷冻保存组分I+III沉淀留作他用。

4.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤(c)所述的分离组分II，是按以下步骤进行的：将上步加压过滤后的上清液用1M的碳酸氢钠溶液调节溶液的pH值为7.0～7.6，加入95％的乙醇，使反应液乙醇的最终浓度为25％～28％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，使其最终温度为-8～-10℃，继续搅拌1小时，静止2小时后用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液做回收乙醇处理，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分II沉淀，组分II沉淀即为人免疫球蛋白的粗制品。

5.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤d所述的层析法纯化，采用的是阴离子交换层析介质：二乙氨乙基交联葡聚糖凝胶装填层析柱层析。将上步获得的组分II沉淀用3～6倍量0～5℃的注射用水溶解，过滤澄清。加入3％盐酸，调节组分II溶解液pH值在6.5～6.7之间，用5％氯化钠溶液调节溶液的电导为1.30～1.50ms/m，将层析柱用pH值为6.5～6.7的0.03M磷酸盐缓冲液平衡至出液的pH值为6.5～6.7后，上样，收集流出的蛋白峰，上样结束后，用0.03M磷酸盐缓冲液冲洗凝胶上的残余蛋白，合并上述两项蛋白液称重，将调整好的蛋白液抽至清洁的反应罐中，启动超滤器，开始预浓缩，蛋白浓度达到6％～8％(g/ml)时，加入9倍2℃注射用水进行透析，透析过程中注意补加3％Hcl适量，即得静注人免疫球蛋白原液。

6.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤e所述的病毒灭活，是在透析结束后，加入麦芽糖，补加注射用水，用3％Hcl调整浓缩后蛋白液的pH值为3.9～4.4，使最终制品人免疫球蛋白含量为53～55g/L，麦芽糖含量为9％～11％(g/ml)，除菌过滤，进行低pH孵育法病毒灭活。

7.根据权利要求1所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于步骤f所述的配制：是在灭菌灭活结束后，再用纳米膜过滤法进行病毒去除处理，然后进行除菌分装既得成品静注人免疫球蛋白。

8.根据权利要求2所述的一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于在加压过滤时，加入1％～2％(g/ml)的硅藻土做助滤剂。