[发明专利]一种人凝血酶原复合物的生产方法

权利要求书

1.一种人凝血酶原复合物的生产方法，包括：

A.分离提取

将原料血浆融化，保持血浆温度在0～4℃，在此温度下离心去除冷沉淀，把上清升温至12～14℃，加入溶胀的凝胶搅拌，吸附45分钟，收集凝胶，用洗涤液快速冲洗凝胶3次或以上，再用洗脱液浸泡10分钟/次，共3次，将制品洗脱下来，收集洗脱蛋白液进行超滤，预浓缩，再用透析液超滤，使残余氯化钠浓度小于0.85％(g/ml)，将制品浓缩至IX因子效价在10IU/ml左右，计量浓缩液的重量；

B.S/D病毒灭活

C.精制

将S/D病毒灭活结束的蛋白液加入平衡处理好的凝胶，吸附45～60分钟。用洗涤液快速洗涤凝胶3次或以上，以去除残余的S/D。再用洗脱液浸泡10分钟/次，共洗3次，将制品洗脱下来，收集洗脱蛋白液进行超滤，预浓缩，再用3～5倍体积透析液超滤，使残余氯化钠浓度小于0.85％(g/ml)，将制品浓缩至IX因子效价在30IU/ml左右将超滤浓缩后蛋白液，调整PH值6.8～7.0，补加透析液，使制品的IX因子最终效价为25IU/ml左右，加入保护剂后除菌、分装、冻干；

D.二次病毒灭活

冻干后的制品经80℃，72小时干热处理，进行第二次病毒灭活。

2.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤A和C中的洗涤液配方为：0.13M～0.15M氯化钠和0.01M～0.03M柠檬酸三钠，用盐酸调溶液的pH值为6.8。

3.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤A和C中的洗脱液配方为：1.6M～2.0M氯化钠和0.01M～0.03M柠檬酸三钠。

4.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤A和C中的透析液配方为：0.01M柠檬酸三钠，用盐酸调溶液的pH值为6.8。

5.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤B的步骤是按以下进行的，将浓缩液边搅拌边按10∶1比例缓慢加入11％(g/ml)S/D溶液，使聚山梨酯-80的最终浓度为1％(g/ml)，磷酸三丁酯的最终浓度为0.3％(g/ml)，加入S/D后，将蛋白液的温度维持在24℃～26℃，保温6小时，进行病毒灭活，每半小时记录蛋白液温度一次。

6.根据权利要求5所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：S/D液的配方是：11％(g/ml)聚山梨酯-80和3.3％(g/ml)磷酸三丁酯。

7.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤C中的保护剂为1％～5％甘氨酸和2～10单位的肝素/ml。

8.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤A和C中所用的凝胶是二乙氨乙基交联琼脂糖凝胶，使用量为血浆总量的1％。

9.根据权利要求1所述的一种人凝血酶原复合物的生产方法，其特征在于：步骤A和C中所用的凝胶是二乙氨乙基交联葡聚糖凝胶，使用量为血浆总量的1％。