[发明专利]抗宿主细胞伴随疱疹病毒的免疫接种

说明书

本申请是2001年8月1日提交的题为“抗宿主细胞伴随疱疹病毒的免疫接种”的中国专利申请01816795.0的分案申请。

本发明涉及抗所谓的宿主细胞伴随(host cell associated)疱疹病毒的免疫接种领域，所述病毒如家禽的Marek’s病病毒(MDV)和人水痘-带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus)(VZV，从潜伏期复活后导致水痘和带状疱疹)，并涉及抗这些病毒所致疾病的免疫接种，尤其涉及家禽疾病特别是抗Marek’s病的免疫接种领域。

特别地，Marek’s病是从大量生产家禽肉开始就存在于家禽业的一个问题。这是一种疱疹病毒所致疾病，引起许多临床症状，从免疫抑制，神经功能失调，贫血和不明淡漠(unspecified apathies)开始，并在感染后期以严重淋巴癌终止。原先对Marek’s病没有治疗和预防措施。随后从火鸡中分离了一种非致病性(apathogenic)相关的(血清型3)病毒(HVT)，并开始用于接种。

然而，在用HVT接种后一段时间，Marek’s病再次出现，而变得明显了，循环的野生病毒改变而抵御由HVT毒株引起的保护作用发生。在此时，发现了一种新的非致病性病毒(Rispens毒株)，其通常具有与导致疾病的病毒相同的血清型。这种疫苗株非常迅速进入市场，并产生良好的接种结果。

然而，在大约10年后，发生了新的疾病爆发，循环野生病毒再一次改变而抵御由所用疫苗株引起的保护作用发生。随后将两种疫苗(HVT和Rispens)组合使用以对所述动物加以保护，然而只暂时见到满意的结果。目前，尽管使用所有的这些接种措施，仍发生了疾病的新爆发。这种现象的原因还不清楚，但明显需要新的强力有效的疫苗。

与抗Marek’s病接种相关的问题是尽管生产Marek疫苗已经很长时间了，但疫苗的制备方法没有改良。这归因于通常宿主细胞伴随病毒只能生长于原代宿主细胞中，如MDV或HVT生长于没有病原体的原代细胞如制备自家禽如鸡的成纤维细胞中，水痘带状疱疹病毒生长于(基本上为原代的)人细胞(同样，当然没有病原体)中，而且离开了各自宿主的特异细胞不能或非常难以获得。这通常使得在实践水平生产抗病毒感染或由这些类型病毒所致疾病的疫苗非常困难，几乎是不可能的，而且因此非常昂贵。

例如，抗Marek’s病的Rispens疫苗，是目前认为唯一足够有效的疫苗，与所有血清型-1Marek病毒相同均是严格宿主细胞伴随的。细胞伴随病毒(例如血清型1和2)的感染性在正常冷冻或冻干期间完全丧失。因此制备这种疫苗包括非常复杂和昂贵的步骤，其中全部细胞必须在液氮中冷冻。所述疫苗必须在液氮中贮存，运输和保持直至使用，因此在运输期间成本巨大且非常困难。

随后，在使用地点，所述疫苗必须非常小心使用，因为感染的细胞对环境因素非常敏感。环境因素如温度提高，暴露于光照，所用的玻璃器具上残余的清洁剂通常会损害所述病毒，由此不能制备出足够存活的疫苗，导致完全疫苗失败。只有当疾病已经开始爆发及感染的家禽显示出疾病症状时，才可以意识到这种失败。

简而言之，迄今为止提供灭活疫苗，亚单位疫苗或重组疫苗以抗Marek’s病的所有尝试均失败了，因此目前仍没有选择包含Marek’s病病毒的活的细胞伴随疫苗的方法。Marek’s病仍然是通过应用感染的细胞制品作为疫苗加以控制的。这些制品不仅含有悬浮于含有DMSO的培养基中的活细胞和所有种类的细胞抗原，它们还必须贮存于液氮中。相继地，冷冻环节必须从疫苗生产开始至使用者直至施用为止。另外，一旦解冻，所述疫苗必须在短时间内施用，而且每只鸟均要注射。由于出现的这些问题，希望制备抗其它细胞伴随疱疹病毒如水痘带状疱疹病毒的疫苗。