[发明专利]HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPLC同时测定白芍及炮制品中9种成分的含量的方法，特别涉及一种波长切换技术。

背景技术

同时测定白芍及炮制品中9种成分的含量，是建立白芍及炮制品质量标准的重要组成部分，为全面评价中药质量提供依据。目前《中国药典》（2010版）仅采用HPLC固定波长法对白芍中芍药苷一种含量较大的成分进行了测定。但白芍中有效物质并不是单一的成分，而且每种成分的最大吸收波长是不一样的。通过测定中药的某一个成分含量的高低对该中药进行质量控制，不够全面。因此，本发明建立一种方法，可同时测定白芍中9种成分，并且利用同一种检测条件和波长切换的方法，这样既可以达到增加质量覆盖面的目的，又可以保证每种成分在最大吸收波长处被检测，提高检测灵敏度。

发明内容

本发明的目的，是提供一种HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量的方法，该方法较其他含量检测方法，如单一成分含量检测、非切波长检测等方法，可以做到更全面，准确的控制白芍质量的效果。

采用的技术方案是：

HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，包括下述工艺步骤：

1、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下：取白芍及炮制品0.5-1.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加50%-70%乙醇7-15倍量，回流提取2-3次，每次2-3小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加50%-70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2、制备对照品储备液，其制备方法如下：精密称取没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2.,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚对照品适量，分别以甲醇配成每1 ml含没食子酸3-8 mg、氧化芍药苷2-7 mg、儿茶素0.03-0.08 mg、芍药内酯苷3-8 mg、芍药苷8-14 mg、苯甲酸0.007-0.013 mg、1,2.,3,4,6-五没食子酰葡萄糖1-4 mg、苯甲酰芍药苷0.6-1.2 mg、丹皮酚0.1-0.5 mg，该溶液即得。

3、白芍及炮制品中9种成分的含量测定:采用高效液相色普法，应用波长切换及梯度洗脱技术：取上述制备的一份供试品溶液，上ODS色谱柱（150-250×4.6-6.0mm,2-5μm），梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5—10%：磷酸水95—90%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈10—15%：磷酸水90—85%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈15—30%：磷酸水85—70%的混合液；洗脱液流速为0.8—1.2ml/min；检测波长：第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm,第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可依次测定并计算出样品中白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度＞1.5。

4、方法学考察：

线性范围的考察  精密吸取各对照品储备液适量，置量瓶中，加甲醇稀释至各对照品浓度均在0.1-200 μl范围内，摇匀，制得混合对照品溶液。分别精密吸取混合对照品溶液适量，在上述色谱条件下分别进样进行测定。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

精密度考察  精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样5次，测得没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚峰面积的RSD均应小于3。

稳定性考察  取供试品溶液，分别在12h内进样10 μl，测得没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚峰面积的RSD均应小于3。

重复性考察  取白芍及炮制品5份，每份0.5-1.5 g，精密称定，按步骤一方法平行制备5份供试品溶液，分别进样10 μl进行测定。结果没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚的RSD均应小于3。