[发明专利]一种具有抗植物病原菌活性的当归内生真菌Fusella sp DG09及其发酵液和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂技术领域，具体涉及一种具有抗植物病原菌活性的当归内生真菌Fusella sp DG09，Fusella sp DG09发酵液及其制备方法和应用。

背景技术

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛、温，归肝、心、脾经，具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。当归药材主产于我国甘肃岷县、武都、成县等地，是一种常用中药材，资源相对比较紧张。而当归、人参等根及根茎类药材在栽培过程中特别容易受到有害病菌的感染，每年因植物病害造成的减产达10～30％，严重的年份高达50％以上，同时药材的外观与内在品质下降。目前中药材植物病害的防治主要采用有机农药，结果造成中药材农药残留超标，严重影响药材的质量及其安全性，已成为中药走向世界的“瓶颈”。此外，在农作物的栽培中，水稻纹枯病、稻瘟病、白叶枯病、小麦白粉病、锈病、赤霉病、植物线虫病和病毒病等危害作物栽培面积达到2700万公顷。因此，当前急需研制高效、低毒、低残留的“无公害”安全农药。而研究开发与利用生物农药防治中药材以及农作物的病虫害已成为当今重要的研究方向。生物农药是指利用生物活体或其代谢产物，主要是利用某些特殊微生物或微生物的代谢产物对害虫、病菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的一类农药制剂，或者是通过仿生合成具有特异作用的农药制剂。具有广谱、高效、安全、无残留、无抗药性产生、不杀害天敌、不污染生态环境等优点。例如用木霉属真菌防治白术、菊花的白鹃病及人参、西洋参的立枯病；利用微生物的代谢产物新多氧霉素防治人参的黑斑病等都取得了良好的效果。

内生真菌是指在植物体内完成其生活史的部分或全部，生长于植物组织细胞间，分布于叶鞘、种子、花、茎、叶片和根中，但又不引起任何病症的微生物，突出强调了内生真菌与植物的互惠共生关系。在内生真菌与宿主植物构成的微生态系统中，内生真菌发挥着重要的生态学功能，80％的植物内生真菌在抗藻类或抗杂草等方面具有较强的生物活性。现代研究表明，内生真菌是一个多样性十分丰富的微生物类群，能够产生一些结构新颖、类型多样的次生代谢产物，如萜类、生物碱类、芳香类、肽类等化合物。目前关于药用植物内生真菌抗菌活性的研究较少，当归研究主要集中在活性成分及药理活性方面的研究，当归内生真菌的研究还未见相关报道，因此，很有必要在现有技术的基础上，充分利用当归资源，寻找具有抗菌活性的当归内生真菌及其代谢物，并开发成防治植物病虫害的生物农药具有重要的应用前景。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，对当归内生真菌进行深入研究，提供一种具有较强抗植物病原菌活性的当归内生真菌Fusella sp DG09，本发明另一个目的是提供当归内生真菌Fusella sp DG09的发酵液及其制备方法和其作为防治植物病害农用制剂中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗植物病原菌活性的当归内生真菌Fusella sp DG09，Fusella sp DG09菌株属于暗梗梭孢霉属Fusella sp真菌，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.4543，保藏日期：2011年1月17日，保藏名称为：暗梗梭孢霉Fusella sp.，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。Fusella sp DG09菌株特征为：分生孢子与菌丝的区别不明显，分生孢子梗和分生孢子均为暗色，分生孢子生在梗的短枝上，单生，分生孢子梭形，无隔膜。

本发明提供的具有抗植物病原菌活性的当归内生真菌Fusella sp DG09的分离方法为：采集新鲜当归外植体，用水冲洗后切割成小段，然后按下列程序对当归外植体表面进行消毒：先用浓度为0.1％氯化汞消毒5～8min，无菌水冲洗2～3次，再用浓度为75％酒精消毒30至40秒，无菌水冲洗2～3次，将消毒后的当归外植体再剪切成0.3～0.5cm长的小段，接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上，在28℃培养8～10天，待当归外植体样品边缘有菌丝长出后，切取样品块边缘菌丝接种于新鲜PDA平皿上继续培养，待长出新鲜菌丝后，挑取菌落边缘菌丝接种到新鲜的PDA斜面上28℃培养5～7天，如此反复转接至新鲜PDA斜面3～5次，得到当归内生真菌Fusella sp DG09。其中所述PDA培养基由下列重量份数的原料制成：20％马铃薯(制作方法为：取马铃薯洗净，切成小块，加入适量蒸馏水，煮沸20min后，过滤，取滤液)、2％葡萄糖、1.5～2.0％琼脂。