[发明专利]一种重组腺病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及一种重组腺病毒及其应用。

背景技术

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性系统紊乱疾病，其临床表现主要为对称性关节肿痛、侵蚀性滑膜炎，甚至进行性关节损伤、畸形、伤残，有时可累及眼、肺等关节外脏器。这种疾病困扰着全世界1-2％的人群，其中大多数是中年妇女，且大多数患者有慢性反复发作的病程。类风湿性关节炎的致残率很高，其治疗一直是人们关注的热点。目前，对类风湿性关节炎的治疗主要包括如非甾体抗炎药、慢作用抗风湿药、糖皮质激素、生物制剂、自体造血干细胞移植以及基因治疗等多种方法。随着对类风湿性关节炎发病机制的深入研究，人们提出了越来越多的治疗类风湿性关节炎的新策略，使许多患者病情得到缓解，但目前尚无根治方法。因此，研究新的治疗类风湿性关节炎的药物势在必行。

对于类风湿性关节炎的治疗策略主要是控制相关炎症因子的平衡。目前以抑制促炎因子TNF-α和IL-1β的活性为重点，利用针对这两种促炎因子的抗体和其受体融合蛋白在临床应用上也取得了一定的效果，但是，还有一部分病人对于阻断这两种因子的治疗不敏感。因此，针对这一部分病人的治疗，需要研究其他的药物治疗策略。大量的研究表明，类风湿性关节炎病人的滑膜液中含有大量的Th17细胞并高表达IL-17，这种促炎因子在关节炎的病理过程的上游起作用，能够刺激巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β，也能够诱导滑膜细胞产生IL-6，IL-8，GM-CSF，PSE2(prostaglandin E2)等因子。已经有研究表明，用IL-17抗体中和IL-17后，CIA小鼠早期关节炎症减轻或消失，晚期CIA小鼠的骨损伤能够有一定程度的恢复。

Th17细胞分泌的IL-17包括IL-17A和IL-17F。这两个炎症分子都是通过IL-17受体家族传递信号，从而影响下游基因表达的。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种重组腺病毒及其应用。

本发明提供的重组腺病毒，为将白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白的编码基因转入宿主细胞，装配得到的重组腺病毒；

所述白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。

所述白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白的编码基因转入宿主细胞是通过重组载体实现的；

所述重组载体为Ad-Easy和重组穿梭质粒经过同源重组得到的载体；

所述重组穿梭质粒为将白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白的编码基因插入到载体Ad-Track-CMV的Hind IIII和EcoR V识别位点间得到的质粒。

所述白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列1。

所述宿主细胞为真核细胞。

所述真核细胞为离体的哺乳动物细胞，优选为HEK-293细胞。

本发明的另一个目的是提供一种重组载体。

本发明提供的重组载体，为Ad-Easy和重组穿梭质粒经过同源重组得到的载体；

所述重组穿梭质粒为将白介素17受体D胞外区Fc融合蛋白的编码基因插入到载体Ad-Track-CMV的Hind III和EcoR V识别位点间得到的质粒。

所述重组腺病毒或所述重组载体在制备预防和/或治疗自身免疫疾病产品中的应用也是本发明保护的范围。

所述自身免疫疾病为类风湿性关节炎。

所述产品为药物。

本发明的第三个目的是提供一种预防和/或治疗类风湿性关节炎的疫苗。

本发明提供的一种预防和/或治疗类风湿性关节炎的疫苗，它的活性成分所述重组腺病毒或所述重组载体。

本发明的实验证明，本发明构建和纯化Ad/hIL-17RD-ECD-Fc的腺病毒载体，构建CIA小鼠模型，用Ad-hIL-17RD-ECD-Fc对CIA小鼠进行预防和治疗，最后通过He染色评价分析CIA小鼠关节炎症及骨损伤的减轻程度，从而为类风湿性关节炎的治疗提供一种新的有效的方法，并利用腺病毒介导的hIL-17RD受体的显性负突变体Ad/hIL-17RD-ECD-Fc，开发能够通过抑制IL-17家族信号传导来治疗类风湿性关节炎的新候选药。

附图说明

图1为Ad-hIL-17RD-ECD-Fc的酶切鉴定

图2为重组腺病毒Ad-hIL17RD-ECD-Fc以及对照腺病毒Ad-GFP在293细胞中的表达

图3为Western blot对重组腺病毒表达物进行检测

图4为Ad-IL17RD-ECD-Fc对于CIA小鼠关节炎的预防作用