[发明专利]ephrin-B2促周围神经损伤修复支架的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗器械技术领域，特别是涉及一种含ephrin-B2蛋白的促周围神经损伤修复支架的制备方法。

背景技术

Eph是一类受体，属于受体酪氨酸激酶(RTKs) 家族的一个亚家族，是一种膜结合蛋白，以跨膜形式存在于细胞膜表面。Ephrin ( Eph family receptor interacting proteins )是与Eph相结合的配体，二者相结合后介导细胞间信号转导。Ephrin 分为ephrin-A 和ephrin-B 两个亚家族，其中ephrin-B 包括三种蛋白质，即ephrin-B1,、ephrin-B2和ephrin-B3 。

最新研究（Parrinello S等，Cell. 2010 Oct 1;143(1):145-55.）表明，ephrin-B2 可以在周围神经损伤部位引导雪旺氏细胞定向生长，进而引导轴突向靶点的再生，从而促进周围神经损伤修复。

创伤或手术等造成的周围神经缺损是修复重建外科的常见疾病,患者通常会面临不同程度的肢体感觉和运动机能障碍所导致的劳动能力丧失或生活不能自理。 为此，临床上需要大量移植物作为修补材料。目前，自体神经移植能够达到的最佳修复效果，但来源有限并会导致供区功能障碍；异体神经移植除了这些问题外还面临排斥反应等问题；这就使自体、异体神经移植的应用受到限制, 不能满足临床需要。所以，采用组织工程方法修复周围神经缺损是解决这一难题的出路。

采用组织工程方法修复周围神经缺损是以研制植入型神经损伤修复器械，即“人工神经”为主要内容。一般来讲，人工神经包括神经导管和神经支架，主要用于周围神经缺损部位的桥接，以促进受损轴突向靶点的再生，从而实现肢体感觉和运动机能障碍的全部或部分恢复。

目前，在国内外的人工神经研究中，取得了许多进展，但是，取得临床应用许可的并不多，而且全集中在国外，如获得美国FDA批准的有NeuraGen、SaluBridge、Neurolac、Neuro Matrix、  Neuroflex 和 Neurotube 等品牌。

从国家食品药品监督管理局相关数据库检索结果显示，在“进口器械”和“国产器械”栏目中，均未检索到人工神经类产品。仅在“医疗器械检测中心受检目录”中检索到“神经修复导管”一项。

从我国知识产权局相关数据库检索结果来看，目前获得授权的人工神经移植物专利近100项。其中，国内机构的相关专利主要集中在材料和种子细胞的选择方面，国外机构的相关专利主要侧重在生物活性物质在神经损伤修复中的作用。

细胞外基质是指动物组织经去细胞处理后余下的水不溶解性物质，主要为胶原蛋白。哺乳动物（包括人类）组织来源细胞外基质已经被大量应用于生物组织工程领域。在神经支架的制备中，以动物去细胞神经作为主要材料的研究最具代表性，并取得了良好的实验结果。但是，来自异体的细胞外基质，仍不可避免地存在一定程度的免疫原性。采用患者自体皮肤来源的细胞外基质制备神经支架的研究尚未见报道。

人工合成材料也被普遍应用于神经支架的研制中。如：聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸聚羟基乙酸共聚物（PLGA）、聚乳酸（PLA）、羧基乙酸内酯、氨基甲酸乙酯、环氧乙烷、聚B-羟基丁酸(PHB)、聚乙二醇、生物可降解玻璃等。在这些合成材料中，PLGA由于具有良好的生物相容性而倍受关注。但是，单独由PLGA制备的材料太硬，不易制备成非常规范的形状，所以，PLGA最好是与其他材料混合使用。

雪旺氏细胞是周围神经系统的主要胶质细胞，由Schwann 于1939 年首先发现并命名。在周围神经系统中，雪旺氏细胞在轴突外形成鞘膜，对轴突起营养和保护作用。在神经损伤的修复中，雪旺氏细胞去分化成祖细胞，引导轴突向靶点生长。轴突的生长方向是由雪旺氏细胞的的聚结方式所决定的。

发明内容

本发明的目的是提供一种ephrin-B2促周围神经损伤修复支架的制备方法，该方法采用患者自体皮肤来源的细胞外基质与人工合成材料聚乳酸聚羟基乙酸共聚物（PLGA）等主要材料制备，依次通过如下步骤实现：

（1）取一定量的患者皮肤，去除表皮及皮下组织，加工成膜状，经去细胞处理、冷冻干燥后作为材料Ⅰ备用；

（2）在患者周围神经受损部位取一定量的神经，常规体外培养获得雪旺氏细胞备用；