[发明专利]piggyBac转座子介导生产体内合成半胱氨酸转基因山羊的载体构建方法及其应用

权利要求书

1.一种生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：合成一段PB碱基序列，将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中，最终构建成pBluSKm-PB-NEO-EGFP转座子载体，所述的PB碱基序列为：

CCCCCCGGTACCCCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAAATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGGACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGCGGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATGACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATTATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTCTTGTTATAGATATCGTCGACCCCCCCCATCGATCCCCCCCCCACGCGTTAAAAGTTTTGTTACTTTATAGAAGAAATTTTGAGTTTTTGTTTTTTTTTAATAAATAAATAAACATAAATAAATTGTTTGTTGAATTTATTATTAGTATGTAAGTGTAAATATAATAAAACTTAATATCTATTCAAATTAATAAATAAACCTCGATATACAGACCGATAAAACACATGCGTCAATTTTACGCATGATTATCTTTAACGTACGTCACAATATGATTATCTTTCTAGGGCCGCGGCCCCCCC。

2.根据权利要求1所述的构建载体的方法，其中在克隆Neomycin抗性基因时所用到的引物序列为：

NEO-F  GTCGACCTGTGGAATGTGTGTCAG；

NEO-R  ATCGATCAGACATGATAAGATACATTG。

3.根据权利要求1或2所述的构建载体的方法，其在在克隆绿色荧光蛋白基因时所用到的引物序列为：

EGFP-F  ATCGATTAGTTATTAATAGTAATCAATTAC；

EGFP-R  ACGCGTGCAGTGAAAAAAATGCTTTATT。

4.权利要求1-3任意一项所述构建方法所构建的载体。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于所述载体的长度为6563bp。

6.权利要求4或5所述的载体的用途，其特征在于所述用途在细胞转染中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于所述细胞为羊的细胞。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述羊的细胞为绒山羊胎儿成纤维细胞。