[发明专利]补体因子H基因型、载脂蛋白上氧化磷酸胆碱和血浆补体因子H定量测定试剂盒及测定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定人组织样本DNA中补体因子H基因型的试剂盒，该试剂盒包含下列成分：

a、从人组织样本中提取DNA模板的试剂；

b、用于从DNA模版中扩增补体因子H基因片段的引物；包括：

补体因子H：rs2274700基因型的扩增引物对：

上游引物：5’-CAGCCCCCACAAAAAGACTA-3’；

下游引物：5’-TGCTTGTCTTTTTCTTATTCTCTTCC-3’；

和补体因子H：rs1061170基因型的扩增引物对：

上游引物：5’-TTTTTGGATGTTTATGCAATCTT-3’

下游引物：5’-GGATGCATCTGGGAGTAGGA-3’；

以及：

c、用于对DNA扩增产物的片断进行基因型鉴定的引物序列，包括：

CFH rs10611170基因型鉴定的引物序列：

5’-TTG TTA TGG TCC TTA GGA AAA TGT TAT TTT CCT TAT TTG GAA AATGGA TAT AAT CAA AAT-3’；

CFH rs2274700基因型鉴定的引物序列：

5’-ATC CTG ATG TTT CAC CAT CTG CTG TTA CAT ATC CTA GTT TGC ATTGAT ATT T-3’。

2.根据权利要求所述的试剂盒，其特征在于所述的人组织样本为外周血样本。

3.鉴定人组织样本DNA中补体因子H基因型的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

a、从人组织样本中提取和纯化DNA模板；

b、从DNA模板中扩增补体因子H的基因片段，扩增用引物包括：

补体因子H：rs2274700基因型的扩增引物对：

上游引物：5’-CAGCCCCCACAAAAAGACTA-3’；

下游引物：5’-TGCTTGTCTTTTTCTTATTCTCTTCC-3’；

和补体因子H：rs1061170基因型的扩增引物对：

上游引物：5’-TTTTTGGATGTTTATGCAATCTT-3’

下游引物：5’-GGATGCATCTGGGAGTAGGA-3’；

c、使用基因型鉴定的引物序列对步骤b得到的补体因子H的基因片段进行扩 增，得到的产物测序进行基因型SNP鉴定，如果其中保护性等位基因为纯合子标记为TT；其中如果致病性等位基因为纯合子标记为CC；其中如果保护性/致病性等位基因为杂合子标记为TC；

所述的基因型鉴定的引物序列包括：

CFH rs10611170基因型鉴定的引物序列：

5’-TTG TTA TGG TCC TTA GGA AAA TGT TAT TTT CCT TAT TTG GAA AATGGA TAT AAT CAA AAT-3’；

CFH rs2274700基因型鉴定的引物序列：

5’-ATC CTG ATG TTT CAC CAT CTG CTG TTA CAT ATC CTA GTT TGC ATTGAT ATT T-3’。

4.一种定量检测载脂蛋白B上氧化磷脂的试剂盒，该试剂盒包含下列成分：

a、抗载脂蛋白B抗体，用以将血浆中低密度脂蛋白俘获；

b、抗磷酸胆碱的抗体，用以与俘获的含有氧化低密度脂蛋白的样品接触。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述抗体的编码基因含有S107VH重链可变区和V-kappa 22VL轻链可变区。

6.定量检测载脂蛋白B上氧化磷脂的方法：

a、用抗载脂蛋白B抗体将血浆中低密度脂蛋白俘获；

b、将抗磷酸胆碱的抗体与含有氧化低密度脂蛋白的样品接触；

c、使所述抗体与氧化磷酸胆碱结合；

d、测定所述抗体与氧化低密度脂蛋白的结合量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或单链抗体可变区片段中的任意一种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述抗体的编码基因含有S107VH重链可变区和V-kappa 22VL轻链可变区。