[发明专利]肝细胞核因子1α治疗慢性肝病的用途

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学、细胞生物学、基因工程以及临床医学如疾病治疗领域。具体地，本发明涉及利用肝细胞核因子1α(HNF1α)治疗人慢性肝病、肝硬化。本发明还涉及将HNF1α基因和蛋白导入人慢性肝病、肝硬化肝脏组织和细胞的方法以及提高这些组织和细胞内HNF1α表达的手段。

背景技术

慢性肝病、肝硬化是临床常见的慢性疾病，治疗难度大，临床预后差，占用了巨大的医疗资源，是危害国民健康的重大疾病。肝纤维化(hepatic fibrosis)是各种慢性肝病发展至肝硬化的必经阶段，是肝脏对慢性损伤的一种修复反应，以细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝内过多沉积为特征。目前认为，肝纤维化为一动态过程，属可逆性病变。因此，阻断、抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的一个重要手段。肝纤维化发生的中心环节是肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)激活并向肌成纤维样细胞(myofibroblasts，MFs)转化，抑制HSC激活、增殖与迁移、诱导凋亡是肝纤维化治疗的重要策略。上皮细胞间质转型(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)主要是指上皮细胞在细胞形态、细胞结构、细胞功能以及细胞粘附、迁移能力等方面获得间质细胞特性的过程。一系列研究表明，肝细胞、HSC、胆管上皮细胞也通过EMT转化为MFs，是肝纤维化进展过程中的重要环节。这些研究是肝纤维化机制与治疗领域新的突破。

肝细胞核因子1(hepatocyte nuclear factor，HNF1)属于POU-同源结构域家族，是调控肝细胞分化和维护肝细胞生物学功能的重要转录蛋白，在分化成熟的肝细胞中高表达，其中HNF1α是HNF1的重要亚型。对HNF1α基因敲除小鼠研究发现：HNF1α是肝脏发生发育中必需的转录因子，与建立和维持胚胎肝脏的最终正常分化发育密切相关，HNF1α基因敲除小鼠可出现严重肝肾功能损害，多于出生后数天内死亡。HNF1α以同源或与HNF1β形成异源二聚体的形式与顺式作用元件结合，与一些转录激活蛋白相互作用来改变启动子或增强子附近的染色体结构，从而在转录水平实现对分化和功能基因表达的调控。尽管既往研究证实HNF1α在维持肝脏功能和肝脏发育过程中发挥重要作用，该转录因子与肝纤维化之间的关系尚不明确；其能否起到阻断或肝逆转纤维化仍未得到证实；对肝纤维化的治疗作用也不明确。国内外亦未将上调HNF1α表达作为抗肝纤维化治疗手段加以研究。我们研究的创新之处在于：利用基因工程技术体外调控HSC中HNF1α基因表达，证实其对HSC活化增殖以及EMT进程的抑制作用，同时进一步研究其可能的分子生物学机制；通过体内HNF1α腺病毒载体注射明确HNF1α表达上调对肝纤维化进程的阻断和逆转作用，这是利用转录因子治疗慢性肝病研究领域的全新探索。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人类HNF1α基因及其产物HNF1α蛋白作为治疗慢性肝病的用途；

本发明的另一个目的在于提供一种治疗慢性肝病的方法。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：

本发明公开了人类HNF1α基因或其编码蛋白作为慢性肝病基因治疗药物的用途。

还提供了慢性肝病基因治疗的方法，包括将HNF1α基因导入肝脏实质细胞和间质细胞，使之表达，所述将HNF1α基因导入肝脏实质细胞和间质细胞的方法包括用质粒转染、腺病毒或腺相关病毒介导。

本发明还提供了一种用于药物治疗慢性肝病的药物组合物，包括人类HNF1α基因和/或其编码蛋白，和/或药用载体或赋形剂，和/或其他已知的治疗慢性肝病药物。

本发明还提供了一种治疗慢性肝病的方法，包括将有效量的上述药物组合物给药于需要这种治疗的患者。上述药物组合物通过口服，肌内，静脉内，皮下等途径来传送。

本发明所述的慢性肝病包括肝纤维化和肝硬化。

附图说明

附图1.免疫组化法及real-time PCR检测人肝硬化组织及相对正常肝组织中HNF1α蛋白及mRNA的表达。

附图2.HNF1α治疗DMN肝损伤大鼠模型示意图。

附图3.HNF1α治疗BDL肝损伤大鼠模型示意图。

附图4.表达HNF1α的重组腺病毒AdHNF1α经尾静脉注射导入不同类型肝纤维化大鼠体内对肝纤维化进程的抑制作用。