[发明专利]一种用于胚胎或细胞的冷冻液及其用途

权利要求书

1.一种用于胚胎或细胞的冷冻液，包含培养液、血清、以及冷冻保护剂，所述冷冻液不含有蔗糖。

2.根据权利要求1所述的冷冻液，其中，所述冷冻液进一步不含有半乳糖或海藻糖；更进一步，所述冷冻液不含有任何二糖；再进一步，所述冷冻液不含有任何糖类。

3.根据权利要求1所述的冷冻液，其中，所述培养液为选自TCM-199、PBSS、以及HTF中的一种或多种，并且所述培养液的含量为30％-60％(v/v)；具体地，为40％-50％(v/v)。

4.根据权利要求1所述的冷冻液，其中，所述血清为牛血清和/或马血清，并且所述血清的含量为5％-50％(v/v)；具体地，为15％-25％(v/v)；更具体地，为20％(v/v)。

5.根据权利要求1所述的冷冻液，其中，所述冷冻保护剂为选自丙二醇、乙二醇、甘油、DMSO中的一种或多种，并且所述冷冻保护剂的含量为20％-50％(v/v)；具体地，为30％-40％(v/v)。

6.根据权利要求1所述的冷冻液，其组分及含量如下面的(1)-(2)组中的任一组所示：

(1)

Hepes缓冲液配制的TCM-199    40％-50％(v/v)

牛血清                      15％-25％(v/v)

乙二醇                      15％-20％(v/v)

DMSO                        15％-20％(v/v)；

(2)

Hepes缓冲液配制的TCM-199    44％(v/v)

牛血清                      20％(v/v)

乙二醇                      18％(v/v)

DMSO                        18％(v/v)。

7.一种用于胚胎或细胞冷冻的试剂盒，其包含权利要求1-6中任一项所述的冷冻液；可选地，所述试剂盒还包含如下的预冻液：

Hepe s缓冲液配制的TCM-199   65％(v/v)

牛血清                      20％(v/v)

乙二醇                      7.5％(v/v)

DMSO                        7.5％(v/v)。

8.一种冷冻胚胎或者细胞的方法，包括使用权利要求1-6中任一项所述的冷冻液或者权利要求7所述的试剂盒的步骤；具体地，包括下述步骤：

1)将胚胎或细胞在37℃-40℃或者39℃预热的预冻液里平衡5-10分钟；

2)将胚胎或细胞转移至37℃-40℃或者39℃预热的冷冻液，在平衡20-30秒后，转移至玻璃化冷冻载体上，并且迅速将载体沉入液氮中。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，步骤2)中从胚胎或细胞放入冷冻液至放入液氮的时间控制在30-60秒之间；具体地，在43-48秒之间；具体地，步骤2)中所述载体为Cryotop或OPS。

10.权利要求1-6中任一项所述的冷冻液在胚胎或细胞冷冻中的用途；具体地，所述胚胎为哺乳动物的胚胎，更具体地为哺乳动物的囊胚，进一步具体地为猪囊胚、牛囊胚、羊囊胚、或鼠囊胚；具体地，所述细胞为哺乳动物的生殖细胞或干细胞；更具体地，所述生殖细胞为哺乳动物的卵母细胞，进一步具体地，为猪卵母细胞、牛卵母细胞、羊卵母细胞、或鼠卵母细胞；更具体地，所述干细胞为胚胎干细胞，进一步具体地，为人胚胎干细胞、猪胚胎干细胞、牛胚胎干细胞、羊胚胎干细胞、或鼠胚胎干细胞。