[发明专利]猪胆汁结合型总胆酸的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪胆汁结合型总胆酸在药剂中的应用，具体涉及到结合型总胆酸的制备及其在治疗结肠炎症中的应用。

背景技术

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)又称慢性非特异性结肠炎，是一种主要累及结肠和直肠的慢性特发性炎症反应，属于炎症性肠病的一种。诸多研究证实结肠炎以自身免疫系统和内环境因素相互作用的严重失调为主要表现，是一种原因不明的大肠粘膜慢性炎症和溃疡性病变，病理改变具有浅表性、弥散性、连续性等特点。结肠炎病变主要限于大肠黏膜和黏膜下层，临床以腹泻、黏液脓血便、腹痛为特征，一般发病缓慢，病程漫长，病情轻重不一，多反复发作。一部分患者一次发作后即停止；一部分患者病程呈慢性持续过程，其病因可能与遗传易感人群在多因素作用下所引起的肠道黏膜免疫系统异常反应相关。结肠炎在欧美国家较多见，据统计，每10万人中发病率分别为：英国，79.9，德国，109，法国，110，瑞士，17.6，新西兰，41.3，美国，42。据世界医学杂志最新报道，在美国约250000人患结肠炎，其年门诊为25万人次，住院人数为2万人次，每年损失一百多万工作日。我国虽无精确统计，但近年来在我国发病率也呈上升趋势。

临床上用于治疗结肠炎的药物主要有氨基水杨酸类、激素、免疫抑制剂、抗生素、肝素等，但目前仍以氨基水杨酸类、皮质类固醇类为首选。氨基水杨酸类是治疗轻、中度广泛性结肠炎患者的一线药物。这类制剂主要有柳氮磺胺吡啶、美沙拉嗪、奥沙拉嗪等，其主要作用机制是改变肠道微生物体系，改变黏膜内前列腺素合成及电解质交换，阻止炎性介质的合成和释放，阻止自然杀伤细胞、肥大细胞、中性粒细胞、黏膜淋巴细胞和巨噬细胞的作用，限制活性氧的产生等。柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine，SASP)是目前治疗结肠炎，尤其是轻、中型结肠炎的常用药物，由于药价便宜、疗效确切，在国内仍为首选药物。柳氮磺胺吡啶是由5-氨基水杨酸和磺胺吡啶结合而成，口服后在结肠细菌偶氮还原酶作用下裂解，磺胺吡啶为载体部分，使药物到达结肠后释放5-氨基水杨酸发挥治疗作用。口服柳氮磺胺吡啶后可使75％的患者临床症状和乙状结肠镜检好转和改善，但柳氮磺胺吡啶的不良反应大，至少20％的患者不能服用此药。常见的不良反应有头痛、胃肠道症状、荨麻疹、呼吸困难、关节痛、肝炎等。免疫抑制剂如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢素等多用于重症难治性结肠炎，治疗上取得了较大的成效，但不良反应也比较明显。

猪胆汁是我国的传统中药，用于热病燥渴、目赤、喉痹、黄疸、百日咳、哮喘、泄泻、痢疾、便秘、痈疮肿毒等症。猪胆汁结合型总胆酸中包括牛磺猪胆酸(Taurohyocholic acid)、牛磺猪去氧胆酸(Taurohyodeoxycholic acid)、牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid)、甘氨猪胆酸(Glycohyocholic acid)、甘氨猪去氧胆酸(Glycohyodeoxycholic acid)和甘氨鹅去氧胆酸(Glycochenodeoxycholic acid)。猪胆汁结合型总胆酸在药剂中的应用，目前还未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述治疗结肠炎药物的缺点，提供一种猪胆汁结合型总胆酸的制备方法。

本发明所要解决的另一个技术问题在于为猪胆汁结合型总胆酸提供一种新用途。

解决上述技术问题所采用的技术方案是猪胆汁结合型总胆酸的制备方法是由下述步骤组成：

1、乙醇浸提

取新鲜猪胆汁，加入其体积5倍量质量分数为95％的乙醇，静置12～14小时，过滤，回收溶剂，得棕黑色浸膏。

2、分离纯化

将步骤1中得到的浸膏加入100-160目的柱层析硅胶中，浸膏与柱层析硅胶的质量比为1∶2，拌样，挥干溶剂，研成80目细粉，细粉与中性氧化铝按质量比1∶10～20干法装于层析柱中，用质量分数为95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，用毛细管点样于硅胶G薄层板上，用展开剂展开后用显色剂显色，薄层板上出现结合型猪去氧胆酸斑点时合并洗脱液，至斑点消失时结束。

上述的展开剂为乙酸乙酯与甲醇、水、冰醋酸的体积比为10∶2∶1∶0.1的混合溶液，显色剂为香草醛硫酸试液或乙醇制硫酸试液。

3、制备猪胆汁结合型总胆酸

将收集到的洗脱液减压回收溶剂，在烘箱内80～100℃烘干，得猪胆汁结合型总胆酸，含量以牛磺猪去氧胆酸计在50％以上。