[发明专利]一种双加氧酶基因及其克隆表达和对芘和苯并[a]芘的转化

权利要求书

1.一种双加氧酶基因，其特征在于该基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；其对应的氨基酸序列由SEQ ID NO：2所示的小亚基序列和SEQ ID NO：3所示的大亚基序列组成。

2.根据权利要求1所述的双加氧酶基因的克隆与表达，其特征在于具体包括以下步骤：

（1）以芘降解菌分支杆菌Mycobacterium sp. NJS-P基因组为模板，根据现有技术的双加氧酶保守序列，设计简并引物，通过PCR技术扩增出包含双加氧酶基因完整阅读框的基因片段，进行TA克隆，进行测序；再设计引物，从包含双加氧酶基因完整阅读框的TA载体中扩增出双加氧酶基因完整阅读框；

（2）将含有双加氧酶基因完整阅读框的TA载体进行酶切，与同样酶切的pET15b表达载体进行连接，构建得双加氧酶表达载体pdoAB-15b；然后再将质粒pdoAB-15b和提供电子载体蛋白的pBRCD共转化于大肠杆菌BL21(DE3)，构建基因工程菌，在培养基中诱导表达出PdoAB可溶性蛋白，即为双加氧酶蛋白。

3.根据权利要求2所述的表达双加氧酶的工程菌对芘和苯并[a]芘的转化，其特征在于所述的具体方法为：

（1）离心收集经过蛋白诱导的工程菌，用1/10体积的M9培养基清洗并重新悬浮菌体；

（2）按10%的量将重悬菌体接入硅油-水双相体系中，其转化体系组分包括25 mL含有氨苄青霉素和庆大霉素的M9培养基和5 mL含100 mg/L的芘或50 mg/L的苯并[a]芘；

（3）28℃培养2天。