[发明专利]一种大型溞储备保种培养方法

说明书

技术领域

本发明属于浮游动物培养领域，涉及一种生态型大型溞储备保种培养方法。

背景技术

大型溞（Daphnia magna）生活于自然水域，属于浮游甲壳类动物，是世界种。它具有生活周期短、繁殖快、经济、对毒物敏感等优点，在水域生态系统中具有重要的作用，可以用于综合评价工业废水的毒性、农药毒性及新化学物质毒性等。大型溞是国际公认的标准试验生物，被广泛应用于水生生物毒理试验。

随着大型溞毒理试验研究的发展，各国相继建立了大型溞毒性测定的标准方法，对试验型大型溞的培养条件做了相关的规定，而针对于大型溞的保种培养却未有提及。试验溞的来源可以从实验室已有的纯培养中挑选、引种，也可以从野外采集。野外采集的溞要经分离、鉴定、纯化，耗时费力。如何简便地在实验室进行保种培养，免去野外采集的烦琐工作，是亟待解决的问题。

大型溞的适宜繁殖的条件为温度22℃左右、pH＝6.5～8.5、培养用水可选用经自然曝气三天以上的自来水或人工配置的稀释水。在该条件下，大型溞能健康快速繁殖，因此需频繁投喂饵料，更换水源，定期移除过量的大型溞，另外，也长期占用培养箱的空间资源。通常情况下大型溞采用单性孤雌生殖方式，在适宜条件下培养的大型溞会大量繁殖，造成培养液中密度太大，导致孤雌生殖停止而进行有性生殖。根据国际标准组织ISO规定，进行毒性实验的大型溞必需是敏感纯种的生物株，因此大型溞的繁殖需约束在孤雌生殖的状态下。大型溞的实验室保种若采用试验培养的方法，操作繁琐，工作量较大，且不利于纯种的保存。

发明内容

本发明克服了现有技术的缺陷，提供了一种操作简单，费用少，水质稳定的生态型大型溞储备保种培养方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种大型溞储备保种培养方法，其特征在于建立溞－藻－螺－鱼水生生态系统。

上述水生生态系统中的藻为斜生栅藻；螺为环棱螺；鱼为青苔鼠。

水生生态系统中斜生栅藻的密度为4×10³~6×10³个/L；幼溞、环棱螺、青苔鼠在系统中的数量关系为150~250：2~3:1~2：1。

上述水生生态系统的建立包括以下步骤：①在装有清水的容器中按照4×10³~4.5×10³个/L的密度接种栅藻； ②接种幼溞40-50个；③放入1-2个环棱螺和1-2条青苔鼠鱼；④将容器置于无阳光直射的环境；温度保持在10-35℃之间；水体pH保持在6.5-8.5之间；每隔7-10天更换8-10%容器体积的曝气后自来水；⑤每周投喂饵料1-2次。

步骤①所述容器为圆形容器，便于搅动水体，将残杂集中于容器中央，用吸管将杂质吸走；容器为玻璃质地，便于观察；容器大小为5L。

步骤①所述清水是自来水放于阳光下曝气三天以上，除去水中残余氯气。

步骤⑤所述饵料为斜生栅藻，其投喂量为每周投喂20~30ml的1×10⁶个/L栅藻1次。

上述水生生态系统建立方法的优选方案如下：

（1）在5L圆形玻璃缸中加入自来水，自来水曝气三天以上，除去水中残余氯气。

（2）在玻璃缸中接种1×10⁶个/L左右的栅藻。

（3）接种幼溞50个。

（4）放入1～2枚环棱螺（Bellamya）和1-2条清洁玻璃缸底部和四壁的青苔鼠(Acantopsis choirorhynchos)。青苔鼠是水草缸及小型鱼缸最常配养的食藻鱼，价格便宜，能清除玻璃缸底部和四壁贴壁生长的藻类，使水缸保持光亮。青苔鼠还能搅动玻璃缸中水体，促进水体中栅藻的繁殖。

（5）将玻璃缸至于室内，无阳光直射。温度在10-35℃范围内即可。每隔7-10天换水10%。

（6）除偶尔添加大型溞的饵料斜生栅藻外，不再添加任何营养盐或其他饵料。

溞－藻－螺－鱼水生生态系统的建立为大型溞的长期稳定保种提供了可能性。原因如下：

1．斜生栅藻作为饵料，被大型溞、环棱螺以及青苔鼠所食，大型溞褪下的壳以及环棱螺、青苔鼠的排泄物又可以为栅藻繁殖提供N、P等营养物质，因此可以减少饵料栅藻的投喂数量。

2．大型溞与环棱螺、青苔鼠不构成捕食关系，大型溞的数量不会因被捕食而锐减。在混养系统中，通过与其他物种共用资源且受混养系统的综合性影响，从而保证了大型溞的孤雌生殖。