[发明专利]猪脂联素球状结构域蛋白gAd基因及其编码的蛋白和应用

权利要求书

1.一组用于扩增猪脂联素球状域的重组基因gAd的引物，其特征在于包括上游引物P3和下游引物P4，分别具有SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。

2.应用权利要求1所述引物扩增得到的猪脂联素球状域的重组基因gAd，具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

3.权利要求2所述猪脂联素球状域的重组基因gAd编码的蛋白，具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列。

4.一种权利要求2所述猪脂联素球状域的重组基因gAd的乳酸乳球菌原核表达载体，具有SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列。

5.一种猪脂联素球状结构域蛋白gAd基因及其编码蛋白的表达方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）根据猪脂肪组织总RNA克隆得到Ad基因；

    （2）采用引物P3和P4，通过PCR扩增方法从步骤（1）所述Ad基因中克隆出gAd基因，并在gAd基因的上游引入Nco I酶切位点和6个组氨酸，下游引入Sac I酶切位点，制备得到gAd基因片段；

（3）将步骤（2）所述gAd基因片段克隆至克隆宿主大肠杆菌MC1061中得到重组质粒，经重组质粒鉴定和扩增后，用该质粒电击转化表达宿主-乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）NZ9000；

（4）通过Nisin诱导，筛选可高效表达gAd蛋白的修饰型乳酸乳球菌株。

6.权利要求4所述乳酸乳球菌原核表达载体转化的乳酸乳球菌菌株。