[发明专利]马氏珠母贝热休克蛋白90基因

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及海洋经济种马氏珠母贝（Pinctada martensii（Dunker）热休克蛋白90（HSP90）基因的核苷酸序列和其所编码的热休克蛋白90的氨基酸序列。

背景技术

热休克蛋白(Heat shock protein )是从原核生物到真核生物普遍存在的一种高度保守的蛋白质，对维持机体的稳定发挥着重要作用，目前已成为当今世界生命科学研究领域的热点。最早关于HSP的研究是Ritossa于1962年在试验中发现，果蝇唾液腺染色体上出现了特殊的“膨突”。Tissieresr于1974年证实发生这种现象的原因是因为这个过程中产生了一系列分子量为70kDa和26kDa的蛋白质，这些蛋白质被命名为热休克蛋白质。HSP可提高细胞的应激能力，特别是耐热能力。预先给生物以非致死性的热剌激，可以加强生物对第二次热剌激的抵抗力，提高生物对致死性热剌激的存活率，这种现象称为热耐受。HSP是一组具有重要生理功能,高度保守的蛋白质分子家族。生理、病理及环境因素等都可诱导热休克蛋白产生,故又称为应激蛋白(Stress Protein)，HSPs对机体具有保护性。

马氏珠母贝 (Pinctada martensii Dunker) 又叫合浦珠母贝(Pinctadafucata)，是生产珍珠的主要贝类。广泛分布于中国、日本、印度、澳大利亚等国的热带和亚热带海区。我国主要分布在广东、广西和海南等海区。目前，我国的海水珍珠产业在南海部分地区已成为支柱性产业。目前马氏珠母贝研究的主要方向集中在养殖，育种，病害控制等方面，在功能基因研究领域还是空白，如何利用已知的信息研究马氏珠母贝的主要功能基因是目前研究的热点，而在其中HSP家族基因是必不可少地研究对象，研究马氏珠母贝的HSP家族基因为马氏珠母贝免疫功能的分析具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供马氏珠母贝热休克蛋白90基因的核苷酸序列和其所编码的蛋白的氨基酸序列。

本发明通过以下技术方案实现的：

马氏珠母贝热休克蛋白90基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No: 1所示。

一种由权利要求1所述基因编码的马氏珠母贝热休克蛋白90，其特征在于其氨基序列如SEQ ID No: 2所示。

马氏珠母贝热休克蛋白90基因的分离过程包括以下步骤：①分析水产类热休克蛋白90的EST序列的同源性；②在高度同源的区域设计简并引物M1、M2，M1的序列如SEQ ID No: 3所示；M2的序列如 SEQ ID No: 4所示；③利用简并引物M1、M2扩增得到马氏珠母贝热休克蛋白90基因核心序列；④利用快速扩增cDNA末端RACE反应设计5’引物M3、M4和3’引物M5、M6，M3的序列如SEQ ID No: 5所示，M4的序列如SEQ ID No: 6所示，M5的序列如SEQ ID No: 7所示，M6的序列如SEQ ID No: 8所示；扩增得到热休克蛋白90如SEQ ID No: 1所示的核苷酸序列。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

（1）     马氏珠母贝热休克蛋白90基因的分离，为进步深入分析HSP90影响下生物抗逆能力，为HSP90在马氏珠母贝中其它功能的筛选和应用打下基础。

（2）     本发明通过对马氏珠母贝HSP90 cDNA表达调控规律的研究，进一步验证HSP90在热激处理下的功能，为探索和提高马氏珠母贝机体防御能力，筛选和培育抗病养殖品种提供支持。

（3）     利用HSP90基因的表达情况来监测养殖环境对马氏珠母贝选育的影响，有针对性的对马氏珠母贝的人工选育提供指导。

具体实施方式：

实施例1  HSP90的cDNA的克隆和测序

1.     同源序列的分析及简并引物设计

从NCBI上下载已经公布的水产类HSP90的EST序列，通过DNAStar中的SeqMan分析所得序列的同源性，之后在高度同源的区域设计简并引物M1，M2。

M1（SEQ ID No: 3）: RGCHGGWGCWGAYATYTCCAT

M2（SEQ ID No: 4）: GCTTGACWGCCARRTGRTCT

2.     HSP90核心EST序列的扩增

2.1 分离总RNA