[发明专利]一种用于妊娠高血压疾病诊断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种用于妊娠高血压疾病诊断的试剂盒。

背景技术

妊娠高血压疾病是最常见的妊娠合并的综合征之一，其影响了7-10％的妊娠者，主要包括妊娠期高血压和子痫前期；子痫前期也称先兆子痫，是妊娠高血压和大量蛋白尿的最主要病因，其临床特征是妊娠20周后出现高血压、水肿、大量蛋白尿和肾功能不全，并随孕月增加而逐渐加重，分娩后病情常迅速好转，大多在产后6周内恢复正常，最迟不超过3个月。2001年Williams将蛋白尿作为子痫前期诊断的必要条件之一，说明肾损害的普遍性。蛋白尿是评价子痫前期肾病较客观的指标，反映肾脏功能受损程度并与病情严重性成正相关。子痫前期已成为母体和胎儿发病及死亡的主要原因，然而，由于其发病机制尚不明确，且缺乏可靠的诊断和治疗方法而使其处理受阻。有报道指出，子痫前期患者蛋白尿的发生不仅源于肾小球内皮细胞损伤，且与足细胞损伤密切相关；研究表明，子痫前期患者分娩低体重儿或早产的风险、预后需进行肾活检的风险以及随后发生终末期肾病的风险均增加，因此，有关子痫前期肾病蛋白尿的发病机制的研究以及寻找新的诊断和治疗方法等课题引起有关研究者关注。

肾活检是当前被人们广泛接受和认可的诊断肾小球疾病的“金标准”，但该方法存在发生严重并发症的潜在风险，且对妊娠妇女这一特殊人群更不适宜接受此类创伤性检查，因此，临床急需一种非侵入性的检查手段用于子痫前期肾病的诊断。

尿液蛋白质组学作为一种高通量方法在肾脏研究中已被较多的用于识别诊断和预后的生物标志物的候选蛋白，而且作为一种非侵入性检查和易被患者接受的工具尤其适用于孕妇。近年来，有研究利用尿液蛋白质组学研究肾脏疾病发生机制、治疗靶点和寻找新的生物标志物。尿液蛋白质组包括全身血液来源和肾脏来源的蛋白质，可反映系统和肾脏特异性的功能异常，由于生物学体液中存在大量的小肽，所以尿液是理想的生物标志物的来源之一，且因尿液容易获取，故与血浆蛋白质组比较则相对简单。

目前，经典的二维电泳(2-DE)已被广泛用于尿液蛋白质组学的研究，但其缺点也逐渐被认识到，如低灵敏度、费时，而且常会漏掉一些低丰度蛋白质。近年有研究采用一种用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)方法避免现有技术的缺点，用于同时定量多种蛋白质并提供精确的鉴定和定量，并与二维液相色谱与串联质谱(2D LC-MS/MS)技术联用，作为高通量蛋白质鉴定和相对定量的标准方法之一。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种非侵入性的识别妊娠高血压疾病相关尿液蛋白质标志物的检查工具，具体涉及一种用于妊娠高血压疾病诊断的试剂盒。

本发明采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)标记和二维液相色谱与串联质谱(2D LC-MS/MS)联用技术，比较妊娠高血压疾病和正常妊娠者尿液蛋白质组，识别和验证与子痫前期蛋白尿发生机制密切相关的蛋白质，依此基础，提供妊娠高血压疾病诊断的试剂盒。

具体而言，本发明的用于妊娠高血压疾病诊断的试剂盒，其特征在于，其包括至少一种检测试剂和捕捉试剂，所述的捕捉试剂能够特异识别子痫前期的角蛋白(Keratin)、α-辅肌动蛋白-4(Alpha-actinin-4)、Afamin、α-2-巨球蛋白(Alpha-2-macroglobulin)、血清白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(SERPINA1)、波形蛋白(Vimentin)、β-2C微管蛋白(Tubulin beta-2C chain)；

本发明中，所述蛋白的121/119比值和121/118比值均上调；

本发明的试剂盒，还包括能够特异识别血管紧张素原(AGT)蛋白的捕捉试剂；

本发明中，所述子痫前期和妊娠期高血压的血管紧张素原(AGT)蛋白表达下调。

本发明的试剂盒，用于检测妊娠高血压疾病患者的尿液。