[发明专利]单标记寡聚核苷酸荧光探针及检测核酸酶的方法

权利要求书

1.一种单标记寡聚核苷酸荧光探针，具有茎环结构，其环部为单链结构，茎部为双链结构，茎部末端是3个以上的连续C碱基和连续G碱基组成的G-C碱基对，C碱基端标记荧光基团，G碱基端具有荧光淬灭作用。

2.一种单标记寡聚核苷酸荧光探针，具有茎环结构，其环部为单链结构，茎部由6-10对互补碱基构成的双链和5’-(dC)_4-8侧链组成，且5’-端标记荧光基团。

3.如权利要求1或2所述的单标记寡聚核苷酸荧光探针，其特征在于，所述环部由5-24个核苷酸残基组成。

4.如权利要求1或2所述的单标记寡聚核苷酸荧光探针，其特征在于，所述荧光基团是6-羧基荧光素、5-四氯荧光素、5-六氯荧光素、6-羧基罗丹明x或6-羧基四甲基罗丹明。

5.权利要求1所述的单标记寡聚核苷酸荧光探针在核酸酶检测中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所检测的核酸酶是下列所述酶i)或酶ii)：

i)对双链DNA的3’或5’末端或者末端附近序列具有切割活性的核酸酶；

ii)以双链DNA的3’或5’末端为反应底物，且与i)所述的核酸酶联用能够切割双链DNA的3’或5’末端或者末端附近序列的核酸酶；

以所述单标记寡聚核苷酸荧光探针作为DNA底物与所述核酸酶反应，实时检测荧光信号的变化，从而分析核酸酶的活性以及酶与DNA反应的动力学过程。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所检测的核酸酶是下列酶中的一种：作用于双链DNA的核酸外切酶、限制性内切酶、作用于双链DNA的修饰酶、具有脱嘌呤/脱嘧啶裂解酶活性的修复酶和对损伤的鸟嘌呤位点具有N-糖基化酶活性的修复酶。

8.权利要求2所述的单标记寡聚核苷酸荧光探针在核酸酶检测中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所检测的核酸酶是下列所述酶1)或酶2)：

1)具有聚合活性或者聚合和保真活性的DNA聚合酶；

2)与1)所述DNA聚合酶联用，使得DNA的聚合延伸反应得以实现的酶。

以所述单标记寡聚核苷酸荧光探针作为DNA底物与所述核酸酶反应，实时检测荧光信号的变化，从而分析核酸酶的活性以及酶与DNA反应的动力学过程。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述酶2)是具有3’-端去磷酸化活性的激酶和磷酸酶。