[发明专利]一种咪唑立宾的提纯方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种生物领域的提纯方法，尤其涉及一种咪唑立宾的提纯方法。

【背景技术】

咪唑立宾(mizoribine，MZR)是1971年从霉菌的培养液中分离而得到的一种咪唑类核苷，后在放射菌(Actinomycetes)科的Streptomyces属streptomyces brefeldianum的发酵产物中也有咪唑立宾，其化学名为1-β-D呋喃核糖-4-氨甲酰基-5羟基咪唑内盐，是一种水溶性化合物。另外，咪唑立宾对核酸代谢中的嘌呤合成具有抑制作用，其进入机体细胞后，能够竞争性地抑制IMP脱氢酶和GMP合成酶，使细胞内的GMP减少，核酸的合成减少，从而进一步抑制细胞的增殖，因此，咪唑立宾可作为一种新型的免疫抑制剂，自1991年12月起在日本应用于临床肾移植，日本许多临床移植中心已将其作为肾移植后的常规免疫抑制药物，我国近年也将其作为肾移植抗排斥药用于临床，且咪唑立宾可用于治疗狼疮性肾炎、类风湿性关节炎、肾病综合征及系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病。

目前国内外咪唑立宾的生产方法主要有微生物发酵法和化学合成法。咪唑立宾的化学合成步骤多，反应条件苛刻，周期长，同时在进行碱基和核糖基团的缩合反应时，还需要进行基团的保护和去保护，从而造成合成反应的总收率偏低，成本居高不下；而微生物发酵生产咪唑立宾具有生产过程绿色、成本低等特点，是一条经济环保的生产途径。但是发酵过程中产生了大量深褐色的色素，而且对光和热不稳定，因此需要用适当的方法对其进行去除杂质、脱色、浓缩处理。现有的咪唑立宾产品生产工艺采用硅胶去色素和脱色液真空浓缩，但是实际效果不理想：其中硅胶对咪唑立宾有较强的吸附作用；且真空浓缩需要一定温度下操作而致使产品进一步降解，导致产品收率大为下降，因此需要寻找更有效的提纯方法。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种咪唑立宾的提纯方法，具有制备方法操作简单、纯化效率高、浓缩倍数较高、且稳定性良好等优点。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种咪唑立宾的提纯方法，将咪唑立宾产生菌经发酵产生的发酵液采用如下步骤进行操作：

(1)发酵液预处理：取适量咪唑立宾发酵液，并用碱性溶液将其pH值调至8.0～10.0，接着把调好pH值的该发酵液采用过滤膜进行常规过滤，从而得到咪唑立宾滤液；

(2)树脂富集：先将(1)中得到的咪唑立宾滤液以每分钟0.01～0.1倍填充床体积的速率泵入层析柱内，且该层析柱中已填装了经预处理的强碱性阴离子交换树脂；接着采用纯化水将层析柱内的溶液洗至中性，之后再用酸性溶液进行洗脱，并收集富集液，即获得咪唑立宾富集液；

(3)膜脱色浓缩：将(2)中获得的咪唑立宾富集液通过超滤膜进行脱色处理，且在该过程期间加入1～5倍富集液体积的纯化水，并收集膜滤出液，即含咪唑立宾的流出液；接着将该滤出液采用纳滤膜进行浓缩以获得咪唑立宾。

进一步地，所述的过滤膜为陶瓷膜，截留分子量为10KD～50KD，优选截留分子量为30KD。

进一步地，所述强碱性阴离子交换树脂是骨架为苯乙烯-二乙烯基苯共聚体上带有季氨基[N-(CH₃)₂C₂H₄OH]的阴离子交换树脂，或是D201树脂，或是D241树脂，或是D246树脂。

进一步地，所述酸性溶液为盐酸或磷酸或乙酸的一种。

进一步地，所述超滤膜为聚醚砜超滤膜，其截留分子量为1KD～5KD，优选截留分子量为1KD。

进一步地，所述纳滤膜为聚酰胺纳滤膜，截留分子量为100D～1KD，优选截留分子量为300D。

本发明一种咪唑立宾的提纯方法的有益效果在于：制备方法操作简单、纯化效率高；在发酵液预处理、脱色浓缩过程中采用了膜技术，即采用膜过滤、膜脱色浓缩，具有高效、节能，过程易控制、操作方便、少污染等优点；咪唑立宾发酵液(呈深褐色)经过强碱性阴离子交换树脂的吸附层析，使目标产物得以富集；膜脱色去杂处理后得到浅黄色溶液，而且进一步膜浓缩，咪唑立宾最终浓缩倍数较高，且产品回收率达到85％以上，另外，本制备方法具有良好的稳定性，并能够进行大规模推广应用。

【具体实施方式】