[发明专利]一种缺失gG,TK和gE基因的重组牛传染性鼻气管炎病毒

说明书

技术领域

本发明属于动物病毒学和基因工程技术领域，具体涉及三基因缺失的一种重组牛传染性鼻气管炎病毒，该病毒缺失了gG、TK和gE基因。该毒株的毒力降低而免疫原性没有改变。本发明还包括利用该重组病毒制备牛传染性鼻气管炎病毒疫苗以及该疫苗的应用。 

背景技术

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR)，又称“坏死性鼻炎”或“红鼻病”，是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis viruses，IBRV)引起的、牛的一种急性、热性、接触性传染病，该病的危害性在于病毒侵入牛体后，可潜伏于一定部位，导致持续性感染，病牛长期乃至终生带毒，在机体抵抗力下降时，又向外排毒。该病对奶牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大的影响，而且急性呼吸道感染可继发牛致命性细菌性肺炎，是造成养牛业经济损失的主要原因之一。该病在世界范围内流行，并且每年都给养牛业造成巨大的经济损失。目前只有少数欧洲国家已经根除了本病，其他一些国家正在实施扑灭计划，或使用标记疫苗区分自然感染和疫苗免疫的牛群，以便于更好的进行监控和防制。 

IBRV为有囊膜的双股DNA病毒，病毒粒子呈圆球型，成熟病毒粒子直径约150-220nm，主要由核心、衣壳和囊膜组成。核心由双股DNA和蛋白质缠绕而成，其核衣壳为立体对称的二十面体，外观呈六角形，上面有162个壳粒，周围为一层含脂质的囊膜。双股DNA分子量为84×10⁶，其中G+C含量为72％。 

据测IBRV基因组可编码大约70个蛋白质，其结构和功能目前大部分已知(李继昌，牛传染性鼻气管炎病的研究进展，黑龙江畜牧兽医.2002，4：50)，其中含有25～33种结构蛋白。存在于病毒囊膜的gB、gC、gD和gE四个主要糖蛋白基因已经测序并在原核和哺乳动物中表达。IBRV糖蛋白能刺激机体产生中和抗体，并且在补体的存在下使感染细胞裂解。gB、gC、gD和gE四个基因主要负责病毒的吸附、渗透和在细胞之间扩散病毒(Belknap EB，Walters LM.，Kelling C，Ayers VK，NorrisJ，McMillen J，Hayhow C，Cochran M，Reddy DN，Wright J，Collins JK.Immunogenicity and protective effcacy of a gE，gG and US2gene-deletedbovine herpesvirus-1(BHV-1)vaccine.Vaccine，1999，17(18)：2297-2305)，gB、gC、gD是刺激宿主免疫应答的主要抗原蛋白(Tikoo SK，Campos M，Babiuk LA.Bovine herpesvirus 1(BHV-1)：biology，pathogenesis，andcontrol.Adv.Virus Res，1995，45：191-223)，gD能诱导产生最高水平的体液和细胞免疫(Babiuk LA，vanDrunen Littel-van den Hurk S，Tikoo SK，Lewis PJ，Liang X.Novel viral vaccines for livestock.Vet.ImmunolImmunopathol，1996，54(1-4)：355-363)。 

gB：gB能引起细胞融合，在哺乳动物细胞中的表达显示出引起细胞融合和多核体的形成，对病毒复制是必需的，国内学对其实现了原核表达并对表达产物的抗原性进行了分析，在杆状病毒中表达的抗原性较gC、gD弱；细胞表面的糖蛋白相互作用，介导病毒吸附的起始，可能调控病毒的数个反式激活子的结合作用，但对病毒的感染并非必需；糖蛋白gB对于穿孔是必需的，并且已经证实侵袭神经和通过神经传播需要gB。 

gC：gC是BHV-1表达最多的糖蛋白，并且在病毒粒子表面即体液中和抗体和细胞毒性T细胞反应的有效部位能够形成最清晰的影象。它对病毒吸附组织培养细胞是重要的，但它在牛细胞内的表达并不影响病毒蚀斑的数量和病毒的存在。此外，gC促进病毒的穿透即病毒进入细胞的第二过程，也可能参与病毒复制的其他过程。BHV-1、HSV-1和IBRV的gC蛋白与细胞表面的糖蛋白相互作用，介导病毒吸附的起始，还能够诱导细胞介导的免疫应答。